[發明專利]一種總三碘甲狀腺原氨酸磁微粒化學發光免疫定量檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201810550557.0
• 申請日: 2018-05-31
• 公開（公告）號: CN108776218A
• 公開（公告）日: 2018-11-09
• 發明（設計）人: 李明勇;姜雪蓮;張玲;胡潔;黃偉
• 申請（專利權）人: 湖南遠璟生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/535;G01N33/577
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本發明涉及一種總三碘甲狀腺原氨酸磁微粒化學發光免疫定量檢測試劑盒及其制備方法，所述試劑盒包括：鏈霉親和素包被的磁微粒懸浮液，堿性磷酸酶標記的三碘甲狀腺原氨酸衍生物，生物素標記的三碘甲狀腺原氨酸抗體，測試稀釋液，三碘甲狀腺原氨酸校準品，三碘甲狀腺原氨酸質控品。本發明的試劑盒與現有試劑盒相比，制備工藝更簡單，成本更低，檢測范圍寬，穩定性好。

技術領域

本發明屬于免疫檢測分析技術領域，涉及檢測血清中總三碘甲狀腺原氨酸 TT3含量的磁微粒化學發光免疫分析試劑盒及其制備方法。

背景技術

3，5，3′三碘甲腺原氨酸（Triiodothyronine，T3）是一種對各種靶器官起作用的重要甲狀腺激素，分子量為651，血漿中半衰期為1.5天。大約80%的T3形成于外周組織，由T4在脫碘酶的作用下脫碘轉化而來，其余的T3是由于甲狀腺球蛋白的水解而被釋放進入血液循環。T3的分泌受促甲狀腺激素（TSH）和促甲狀腺激素釋放激素（TRH）的調節，而T3的水平對TSH也存在負反饋調節。

T3是通過與血清中的運載蛋白結合而被轉運的，主要有甲狀腺素結合球蛋白（TBG），前白蛋白和白蛋白，只有約0.4%的T3是游離的，但游離T3（FT3）才真正具備激素的生物活性。體內TT3的濃度受甲狀腺激素結合蛋白的濃度的影響，而FT3不受影響，TT3和FT3保持動態平衡，維持正常的甲狀腺功能，所以TT3的定量檢測對早期的甲狀腺疾病診斷非常有價值。

用于體內總三碘甲狀腺原氨酸測定的主要方法有放射免疫分析法、酶聯免疫吸附分析法、化學發光免疫分析法等。 目前常用的放射免疫分析法（RIA）是用I¹²⁵標記三碘甲狀腺原氨酸半抗原來實現的，其合成工藝復雜，有效期短，對環境有一定污染，影響檢測結果的因素較多。近幾年來，化學發光免疫分析技術發展迅速，靈敏度、特異性以及自動化程度均達到或超過了RIA水平，特別是標記物的穩定性和不污染環境是RIA法無法比擬的。

目前各大中型醫院均進口了全自動化學發光免疫分析系統，但是儀器和試劑價格昂貴。

發明內容

本發明要解決的問題是提供總三碘甲狀腺原氨酸的化學發光免疫定量檢測試劑盒及其制備方法，避免了放射性免疫分析的試劑有效期短、存在放射性污染、操作繁瑣等缺點，且解決了靈敏度低，穩定性差，成本高的缺陷。本發明公開了一種制備工藝簡單、成本低廉、穩定性好的總三碘甲狀腺原氨酸的化學發光免疫定量檢測試劑盒以及制備方法。

本發明采用的技術方案為：

一種總三碘甲狀腺原氨酸磁微粒化學發光免疫定量檢測試劑盒，包括鏈霉親和素包被的磁微粒懸浮液，堿性磷酸酶標記的三碘甲狀腺原氨酸衍生物，生物素標記的三碘甲狀腺原氨酸抗體，測試稀釋液，總三碘甲狀腺原氨酸校準品，總三碘甲狀腺原氨酸質控品。

進一步的，所述鏈霉親和素包被的磁微粒懸浮液為表面包裹帶有鏈霉親和素的四氧化三鐵懸浮于磁微粒包被物緩沖液中所形成的懸浮液，所述鏈霉親和素包被的磁微粒懸浮液的濃度為0.1mg/mL～1.0mg/mL，所述磁微粒包被物緩沖液為20mM～200mM Tris（三羥甲基氨基甲烷）緩沖液，PH范圍為6.5～8.0。

所述堿性磷酸酶標記的三碘甲狀腺原氨酸衍生物為堿性磷酸酶和三碘甲狀腺原氨酸衍生物的偶聯物，其中三碘甲狀腺原氨酸衍生物為N-羥基琥珀酰亞胺(NHS) 和三碘甲狀腺原氨酸的化學合成物質，或N-磺酸化羥基琥珀酰亞胺(Sulfo-NHS)和三碘甲狀腺原氨酸的化學合成物質。

所述生物素標記的三碘甲狀腺原氨酸抗體為生物素和三碘甲狀腺原氨酸抗體的偶聯物，其中三碘甲狀腺原氨酸抗體為小鼠單克隆抗體。