[發明專利]一種Sanfilippo A綜合癥慢病毒載體、慢病毒及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201810549057.5
• 申請日: 2018-05-31
• 公開（公告）號: CN108728495A
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發明（設計）人: 王盈穎
• 申請（專利權）人: 深圳市免疫基因治療研究院
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N7/01;C12N5/10;A61K48/00;A61P25/14;A61P25/20
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明提供一種Sanfilippo A綜合癥的慢病毒載體、慢病毒及其制備方法和應用，所述慢病毒載體為在pTYF慢病毒載體的5’端的剪接供體位點進行改造，其中，所述慢病毒載體還包括SGSH基因。本申請改造后的慢病毒載體的基礎上特異地連入SGSH基因，能夠在保障安全性的同時實現更高效的基因傳遞，使得SGSH基因在轉基因的大腦相關細胞中的表達量明顯增加，能夠更高效的完成Sanfilippo A綜合癥基因治療過程中正常基因的傳遞。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，涉及一種Sanfilippo A綜合癥慢病毒載體、慢病毒及其制備方法和應用，尤其涉及一種應用改良后的慢病毒載體優化表達SGSH基因用于制備治療戈謝病的藥物。

背景技術

Sanfilippo綜合癥，屬于三型黏多糖積貯癥(Mucopolysaccharidosis(MPS)typeIII)，是五種MPSⅢ型綜合癥中的一種，其屬于常染色體隱性遺傳疾病，屬于神經退行性溶酶體堆積紊亂疾病。MPSⅢA涉及到了硫酸胺酶的缺失從而導致了硫酸乙酰肝素(heparansulfate，HS)在腦部的堆積，主要堆積在網狀內皮組織和單核巨噬細胞系統，最嚴重的是堆積在神經元中，這些堆積導致了器官的功能性紊亂。病人會有嚴重的行為上的改變，包括多動癥和睡眠失調，晚期會有意識和運動功能的下降，壽命會顯著縮短。病人多發于兒童或青少年時期，發病起始年齡大多在2-6歲之間，10歲之后病情開始惡化，15歲左右死亡，無性別、種族和地域特異性。

Sanfilippo A是單基因突變造成的溶酶體堆積紊亂疾病(lysosomal storagedisorders，LSDs)，涉及到的基因是SGSH，因此基因治療方法理論上可以實現對該病的徹底治療。在腦部直接注射攜帶正常SGSH基因的毒載體可以直接對基因缺陷細胞進行腦內轉染，進而修復各種腦部細胞，分泌出所需要的硫酸胺酶，減少硫酸乙酰肝素的堆積，從而進行下一步的降解，并可以進過交叉校正(cross correction)方式修復周圍細胞乃至整個腦部的細胞。體外對病毒載體進行修飾，直接注射入腦，此方法方便快捷，成本低廉，適用性很高。

目前國內外應用病毒載體進行基因傳遞的基因治療方法雖然有許多，但是不同病毒載體，甚至相同載體的不同制備方法引起的基因傳遞效率差異明顯，而基因傳遞效率將直接影響疾病的治療效果。現在大多應用細胞治療對遺傳病進行治療的方法均存在效率過低以及僅針對血液干細胞進行修飾，使得疾病治療的臨床效果始終達不到預期，因此急需能夠最大程度上提高病毒基因傳遞效率以及方法來提高遺傳疾病的療效。

Abeona Therapeutics Inc.(Nasdaq：ABEO)是一家臨床階段生物制藥公司，致力于開發危及生命的罕見遺傳性疾病的治療，正在進行基因治療的臨床1/2期試驗。正在進行的1/2期臨床試驗已獲得FDA的快速審查資(FastTrack designation)，該臨床試驗旨在評估基因治療對MPS IIIA患者的安全性和療效的初步效果。按照試驗的設計，在低劑量和高劑量組的受試者接受單次注射向全身特別是中樞神經系統輸送病毒載體，以引入構成MPSIIIA的疾病病因的基因矯正拷貝，受試者在注射后最初6個月的多個時間點接受安全評估和生物效價的初始信號評估。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供了一種Sanfilippo A綜合癥慢病毒載體、慢病毒及其制備方法和應用，所述Sanfilippo A綜合癥慢病毒載體轉染效率更高，穩定性更強，安全性更好。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供了一種慢病毒載體，所述慢病毒載體為在pTYF慢病毒載體的5’端的剪接供體位點進行改造，具體改造方式如下：

(a)其5’端的剪接供體位點被刪除或改造，改造后的慢病毒載體剪接供體位點不是所述包裝載體和所述參照慢病毒之間的同源重組的潛在位點；

(b)其仍具有病毒包裝信號功能；