[發(fā)明專(zhuān)利]一種Sanfilippo A綜合癥慢病毒載體、慢病毒及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810549057.5
• 申請(qǐng)日: 2018-05-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108728495A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-11-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王盈穎
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 深圳市免疫基因治療研究院
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/867
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/867;C12N7/01;C12N5/10;A61K48/00;A61P25/14;A61P25/20
• 代理公司: 北京品源專(zhuān)利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種Sanfilippo A綜合癥慢病毒載體，其特征在于，所述慢病毒載體為在pTYF慢病毒載體的5’端的剪接供體位點(diǎn)進(jìn)行改造，具體改造方式如下：

(a)其5’端的剪接供體位點(diǎn)被刪除或改造，改造后的慢病毒載體剪接供體位點(diǎn)不是所述包裝載體和所述參照慢病毒之間的同源重組的潛在位點(diǎn)；

(b)其仍具有病毒包裝信號(hào)功能；

其中，所述慢病毒載體還包括SGSH基因。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的慢病毒載體，其特征在于，所述SGSH基因的核苷酸序列如SEQID NO.1所示或與其具有至少80％同源性，優(yōu)選至少85％同源性，進(jìn)一步優(yōu)選至少95％同源性的核苷酸序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的慢病毒載體，其特征在于，所述SGSH基因之前還包括啟動(dòng)子序列；

優(yōu)選地，所述啟動(dòng)子序列為EF1α和/或CMV，優(yōu)選為EF1α；

優(yōu)選地，所述EF1α的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示或與其具有至少90％同源性，優(yōu)選至少95％同源性的核苷酸序列。

4.一種重組慢病毒，其特征在于，將包含如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的慢病毒載體pTYF與包裝輔助質(zhì)粒pNHP和pHEF-VSV-G共轉(zhuǎn)染哺乳細(xì)胞得到的重組慢病毒；

優(yōu)選地，所述哺乳細(xì)胞為HEK293T細(xì)胞和/或TE671細(xì)胞。

5.一種制備如權(quán)利要求4所述慢病毒的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將慢病毒載體pTYF 5’端的剪接供體位點(diǎn)進(jìn)行點(diǎn)突變；

(2)全基因合成啟動(dòng)子及SGSH基因序列并插入步驟(1)點(diǎn)突變的慢病毒載體中；

(3)將構(gòu)建的慢病毒載體與包裝輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染哺乳細(xì)胞得到重組慢病毒。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述插入的位點(diǎn)為BamHI和SpeI酶切位點(diǎn)之間。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述的包裝輔助質(zhì)粒為pNHP和pHEF-VSV-G；

優(yōu)選地，所述哺乳細(xì)胞為HEK293T細(xì)胞和/或TE671細(xì)胞；

優(yōu)選地，所述共轉(zhuǎn)染哺乳細(xì)胞后的培養(yǎng)時(shí)間為24-72h。

8.一種重組細(xì)胞，其特征在于，所述重組細(xì)胞包括如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的慢病毒載體和/或如權(quán)利要求4所述的重組慢病毒；

優(yōu)選地，所述重組細(xì)胞為重組干細(xì)胞，優(yōu)選為外周血干細(xì)胞和/或間充質(zhì)干細(xì)胞。

9.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的慢病毒載體、如權(quán)利要求4所述的重組慢病毒或如權(quán)利要求8所述的重組細(xì)胞中的任意一種或至少兩種的組合。

10.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的慢病毒載體、如權(quán)利要求4所述的重組慢病毒、如權(quán)利要求8所述的重組細(xì)胞或如權(quán)利要求9所述的藥物組合物在制備Sanfilippo A綜合癥治療的藥物和/或試劑中的用途；

優(yōu)選地，所述組合物還包括藥學(xué)上接受的輔料；

優(yōu)選地，所述輔料為賦形劑、稀釋劑、載體、調(diào)味劑、粘合劑和填充劑中的任意一種或至少兩種的組合。