[發明專利]檢測人PML-RARa融合基因的試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 201810548849.0
• 申請日: 2018-05-31
• 公開（公告）號: CN110551816A
• 公開（公告）日: 2019-12-10
• 發明（設計）人: 熊慧;謝立群;徐任;陸孟超;陳嘉錚;李云航;高峰英
• 申請（專利權）人: 蘇州云泰生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 11390 北京和信華成知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 胡劍輝

1.一種檢測人PML-RARa融合基因的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括核酸擴增試劑，所述核酸擴增試劑包括PML-RARa PCR反應液和內參PCR反應液；

其中，所述PML-RARa PCR反應液用于檢測PML-RARa融合基因，所述內參PCR反應液用于檢測內參基因；

所述用于檢測PML-RARa融合基因的引物和探針包括由SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:3所示的上游引物、由SEQ ID NO:4所示的下游引物、由SEQ ID NO:5所示的探針；

所述用于檢測內參基因的引物和探針包括由SEQ ID NO:6所示的上游引物、由SEQ IDNO:7所示的下游引物、由SEQ ID NO:8所示的探針；

所述探針的兩端標記有熒光基團。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，SEQ ID NO:5所示核苷酸序列的5’端標記有FAM、3’端標記有TAMRA，SEQ ID NO:8所示核苷酸序列的5’端標記有FAM、3’端標記有TAMRA。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述核酸擴增試劑中還包括PML-RARa酶液，所述PML-RARa酶液中包括Taq酶和UNG酶。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括對照品，所述對照品包括陰性對照和陽性對照，所述陰性對照為工藝用水，所述陽性對照為質粒混合液，所述質粒混合液中含有PML-RARA-L質粒DNA和內參質粒DNA；

其中，PML-RARA-L質粒DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示、內參質粒DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示。

5.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括參考品，所述參考品用于形成目的基因和內參基因的標準曲線從而對目的基因和內參基因分別進行定量，所述參考品包括PML-RARa參考品1、PML-RARa參考品2、PML-RARa參考品3、PML-RARa參考品4、內參參考品1、內參參考品2、內參參考品3和內參參考品4；

所述PML-RARa參考品1、所述PML-RARa參考品2、所述PML-RARa參考品3和所述PML-RARa參考品4中含有PML-RARA-L質粒DNA，所述內參參考品1、所述內參參考品2、所述內參參考品3和所述內參參考品4中均含有內參質粒DNA；

其中，所述PML-RARa參考品1中的質粒濃度為1×10⁶copies，所述PML-RARa參考品2中的質粒濃度為1×10⁵copies，所述PML-RARa參考品3中的質粒濃度為1×10⁴copies，所述PML-RARa參考品4中的質粒濃度為1×10³copies，所述內參參考品中的質粒濃度為1×10⁶copies，所述內參參考品2中的質粒濃度為1×10⁵copies，所述內參參考品3中的質粒濃度為1×10⁴copies，所述內參參考品4中的質粒濃度為1×10³copies；

PML-RARA-L質粒DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示，內參質粒DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示。

6.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還含有PML-RARa MIX反應液。

7.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒所適用的樣本選自外周血標本。