[發明專利]一種飛燕草素-3-O-半乳糖苷的分離純化方法及其應用

有效

• 申請號: 201810548175.4
• 申請日: 2018-05-31
• 公開（公告）號: CN108409805B
• 公開（公告）日: 2020-01-21
• 發明（設計）人: 陳衛;謝佳宏;徐陽;謝亮華
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C07H1/08
• 分類號: C07H1/08;C07H17/065;A61P3/10
• 代理公司: 33224 杭州天勤知識產權代理有限公司
• 代理人: 朱朦琪

本發明公開了一種飛燕草素?3?O?半乳糖苷的分離純化方法及其在制備α?葡萄糖苷酶抑制劑中的應用，該分離純化方法以花色苷組成復雜的藍莓為原料，包括醇提濃縮、大孔樹脂吸附、制備液相色譜純化和高速逆流色譜分離，通過將制備液相色譜和高速逆流色譜技術結合，再通過對工藝參數的優化，分離制備得到高純度的飛燕草素?3?O?半乳糖苷單體，純度高達99％；經活性試驗發現，該飛燕草素?3?O?半乳糖苷單體能夠顯著抑制α?葡萄糖苷酶的活性，可用于制備α?葡萄糖苷酶抑制劑。

技術領域

本發明涉及天然產物的分離純化領域，具體涉及一種飛燕草素-3-O-半乳糖苷的分離純化方法及其應用。

背景技術

糖尿病是世界范圍內常見的慢性疾病之一，糖尿病患者通常伴隨著高血糖癥狀，長期的高血糖能夠引起神經、心臟、血管和腎臟等組織器官的損害，并引起多種急慢性并發癥的發生。據世界衛生組織(WHO)統計數據顯示，2014年全球有4.22億的糖尿病患者，其中2型糖尿病最為常見。近年來隨著人們飲食習慣、生活方式的改變及老齡化進程的加速，我國糖尿病的患病率急速上升，至2016年底我國的糖尿病患者數量已達到1.1億。因此，有關糖尿病防治的研究有著極為重要的意義。

α-葡萄糖苷酶(alpha-D-glucoside glucohydrolase,EC 3.2.1.20)又稱為α-D-葡萄糖苷酶水解酶，是糖苷水解酶GH31家族中的膜結合酶，包括蔗糖酶、麥芽糖酶、異麥芽糖酶等，主要存在于小腸絨毛粘膜刷狀緣細胞中。進食后，α-葡萄糖苷酶可以將食物中的碳水化合物水解為葡萄糖，葡萄糖被吸收后進入血液循環導致血糖升高，因此，α-葡萄糖苷酶是控制餐后血糖的主要靶酶之一。目前，國內上市的α-葡萄糖苷酶抑制劑主要有阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇，使用這些抑制劑通常會引起胃腸道的不良反應，如腹脹、排氣等。因此，挖掘安全有效的食品功能因子，靶向抑制α-葡萄糖苷酶活性，對于降低糖尿病的發病率及改善糖尿病患者的健康狀況將是一個行之有效的策略。當前國內外大量的研究人員已聚焦于食源性功能因子，試圖從食物中篩選出活性優良且不會對人體造成副反應的α-葡萄糖苷酶抑制劑。目前，已有報道，食源性來源的黃酮類化合物、生物堿、酚類化合物、姜黃素類化合物、萜類化合物在體外具有較強的α-葡萄糖苷酶抑制活性，且活性優于陽性藥物阿卡波糖，但有關花色苷的α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究報道不多，目前已發現矢車菊素-3-O葡萄糖苷具有α-葡萄糖苷酶活性。

藍莓，又稱越橘、藍漿果，屬杜鵑花科，越橘屬植物，不僅富含人體所需的基礎營養成分，而且還富含多種不同種類的花色苷，具有活化視網膜、降血糖、抗炎和抗腫瘤作用。我國的藍莓栽培起步較晚，目前主要以直接鮮食消費為主，或加工成果醬、果汁、果酒等初級產品，有關高附加值的藍莓產品在國內外市場上卻寥寥無幾。

因此，探索一種從藍莓中分離制備高純度花色苷單體的方法對藍莓的深入研究及應用具有重大的意義。但由于花色苷類化合物結構相似，極性差異較小，導致高純度花色苷單體的分離純化極其困難。

但目前，已經有報道分離純化得到高純度花色苷單體。

如公開號為CN 106366141A的中國專利文獻公開了一種分離制備天竺葵素-3-O-葡萄糖苷單體的方法，以草莓為原料，通過冷凍干燥、醇提濃縮、分級萃取、AB-8大孔樹脂純化制備得到。又如公開號為CN 106831911A的中國專利文獻公開了一種從蓬蘽中分離純化天竺葵素-3-O-葡萄糖苷單體的方法，包括醇提濃縮、乙酸乙酯萃取、AB-8大孔樹脂及高速逆流色譜。上述技術方案中雖然均制備得到了高純度的花色苷單體，但主要原因在于草莓和蓬蘽中花色苷組成簡單，僅含矢車菊素-3-O-葡萄糖苷、天竺葵素-3-O-葡萄糖苷和天竺葵素-3-O-蕓香糖苷的3種花色苷化合物，其中天竺葵素-3-O-葡萄糖苷占總花色苷含量的80％以上。

但對于如藍莓(含有至少12種結構相似的花色苷化合物)等花色苷組成復雜的原料，上述的技術方案則難以實現高純度花色苷單體的純化與制備。目前，通過單一的柱層析或色譜技術制備得到的高純度花色苷均為花色苷混合物，而非高純度花色苷單體。