[發明專利]一種飛燕草素-3-O-半乳糖苷的分離純化方法及其應用

有效

• 申請號: 201810548175.4
• 申請日: 2018-05-31
• 公開（公告）號: CN108409805B
• 公開（公告）日: 2020-01-21
• 發明（設計）人: 陳衛;謝佳宏;徐陽;謝亮華
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C07H1/08
• 分類號: C07H1/08;C07H17/065;A61P3/10
• 代理公司: 33224 杭州天勤知識產權代理有限公司
• 代理人: 朱朦琪

1.一種飛燕草素-3-O-半乳糖苷的分離純化方法，其特征在于，包括：

(1)醇提濃縮：以藍莓為原料，經醇提濃縮得到藍莓花色苷粗提液；

(2)大孔樹脂吸附：將所述藍莓花色苷粗提液注入大孔樹脂，經洗脫及后處理得到藍莓花色苷提取物凍干粉；

(3)制備液相色譜純化：采用C18色譜柱，經流動相進行梯度洗脫，再經后處理得到飛燕草素-3-O-半乳糖苷粗品凍干粉；

所述流動相：A相為純甲醇或酸的體積百分濃度為0.1～1.5％的酸-甲醇體系，B相為甲酸體積百分濃度為1.5～5％的甲酸-水體系；

所述梯度洗脫的程序為：A相的體積百分濃度在0～5min內保持5％不變，在5～30min內從5％上升至60％，收集15～16.5min的洗脫物；

(4)高速逆流色譜分離：以正丁醇-甲基叔丁基醚-甲醇-水-三氟乙酸為兩相溶劑體系，經分離得到飛燕草素-3-O-半乳糖苷單體；

所述正丁醇、甲基叔丁基醚、甲醇、水和三氟乙酸的體積比為2：2：1：5：0.01。

2.根據權利要求1所述的飛燕草素-3-O-半乳糖苷的分離純化方法，其特征在于，步驟(1)中，所述醇提濃縮，具體為：

將洗凈的藍莓與酸性乙醇溶液混合，超聲提取完全后過濾并收集濾液，濾液在40～50℃下真空旋轉蒸發除去乙醇并濃縮，得到藍莓花色苷粗提液；

所述酸性乙醇溶液為酸的體積百分濃度為0.1～1.5％的乙醇溶液；

所述酸選自鹽酸、甲酸、乙酸、草酸中的至少一種；

所述乙醇溶液的體積百分濃度為50～95％；

所述藍莓與酸性乙醇溶液的質量體積比為1：5～12g/mL。

3.根據權利要求1所述的飛燕草素-3-O-半乳糖苷的分離純化方法，其特征在于，步驟(2)中，所述大孔樹脂吸附，具體為：

將所述藍莓花色苷提取液注入大孔樹脂中，先用去離子水沖洗大孔樹脂，再用體積百分濃度為2～22％的酸性醇溶液進行梯度洗脫，收集體積百分濃度為14～18％的酸性醇溶液的洗脫液，40～50℃下真空旋轉蒸發除醇后，真空冷凍干燥得到藍莓花色苷提取物凍干粉；

所述大孔樹脂的牌號選自AB-8、HPD-100、D101或DM-130；

所述酸性醇溶液選自酸的體積百分濃度為0.1～1.5％的醇溶液，醇溶液選自甲醇溶液或乙醇溶液，酸選自鹽酸、甲酸、乙酸中的至少一種。

4.根據權利要求1所述的飛燕草素-3-O-半乳糖苷的分離純化方法，其特征在于，步驟(3)中，先將所述藍莓花色苷提取物凍干粉經去離子水復溶后，再注入制備液相色譜儀中進行純化；

所述復溶后的濃度為20～120mg/mL，進樣量為1～4mL；

所述C18色譜柱的規格為20mm×250mm，溫度為25～30℃；

所述A相中的酸選自甲酸或三氟乙酸。

5.根據權利要求4所述的飛燕草素-3-O-半乳糖苷的分離純化方法，其特征在于：

所述復溶后的濃度為50～120mg/mL；

所述流動相：A相為純甲醇，B相為甲酸體積百分濃度為1.5～5％的甲酸-水體系，流動相的流速為5～10mL/min。

6.根據權利要求1所述的飛燕草素-3-O-半乳糖苷的分離純化方法，其特征在于，步驟(3)中，所述的后處理包括減壓濃縮和真空冷凍干燥。

7.根據權利要求1所述的飛燕草素-3-O-半乳糖苷的分離純化方法，其特征在于，步驟(4)中，所述高速逆流色譜分離，具體為：

配制所述兩相溶劑系統，上相為固定相，下相為流動相，以20～30mL/min的流速將所述固定相泵入高速逆流色譜儀中，在25～35℃、主機轉速為700～1000r/min的條件下，以1～8mL/min的流速泵入所述流動相，待兩相達到平衡后，將所述飛燕草素-3-O-半乳糖苷粗品凍干粉用流動相溶解后進樣，經液相檢測后，收集僅包含目標產物的流出液，再經減壓濃縮、冷凍干燥后得到飛燕草素-3-O-半乳糖苷單體。