[發明專利]一種藻紅蛋白熒光探針及其用于黃曲霉毒素B1快速檢測的方法

在審

• 申請號: 201810543860.8
• 申請日: 2018-05-31
• 公開（公告）號: CN108508214A
• 公開（公告）日: 2018-09-07
• 發明（設計）人: 鄭允權;張文怡;莫柳達;黃劍東;郭養浩;石賢愛
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/64
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊;李翠娥

本發明提供了一種藻紅蛋白熒光探針及其用于黃曲霉毒素B1快速檢測的方法。本發明首先將熒光藻紅蛋白與黃曲霉毒素B1單克隆抗體進行偶聯制成熒光探針，并將其應用于試紙條快速檢測中，基于競爭免疫層析法原理，建立一種黃曲霉毒素B1快速測定的方法。本發明的快速檢測試紙條操作簡單快捷，適用于現場大批量樣品的快速檢測。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種藻紅蛋白熒光探針及其用于黃曲霉毒素B1快速檢測的方法。

背景技術

藻紅蛋白是一種存在于海藻中的天然色素蛋白，具有抗氧化、抗炎癥、提高免疫力等生物活性，常作為天然色素添加劑應用于食品和化妝品中，作為生理活性物質應用于保健品、藥品等。藻紅蛋白具有良好的水溶性、物理學和光譜學性質，可長時間保存于液體中，且熒光特性等物理性質幾乎不會改變。藻紅蛋白中的發色團為開鏈四吡咯結構，命名為藻紅素，包被在蛋白內部，與外界環境相隔絕。因此藻紅蛋白的熒光性質不易受到影響，可用作熒光標記物。藻紅蛋白交聯物一般不會與細胞發生非特異性結合。而很多其他染料分子，常常會與細胞之間發生非特異性結合。因此藻膽蛋白常用于熒光劑。

免疫層析技術（immunochromatography）是近20世紀末發展起來的一種分析方法，具有特異性、操作簡單、快速等優點，因而成為環境保護、食品安全快速檢測分析研究的熱點。

根據待檢物質和抗體不同的結合模式，可將免疫層析技術分為直接法和競爭法。直接法用于檢測多抗原位點的生物大分子，如人類、動物疫病的早期診斷、生化分析、抗體水平監測。競爭法用于抗原結合位點少或僅具有單個抗原結合位點的小分子化合物，多采用標記抗體模式。

競爭法的工作原理為：在毛細管作用力下，待檢物質先與結合墊處的標記抗體進行識別而結合，形成抗原-標記抗體復合物繼續向前層析，到達T線時，未結合的標記抗體繼續與T線的偶聯抗原結合形成偶聯抗原-標記抗體復合物而顯色，當待檢樣品中的抗原越多，結合的標記抗體越多，則T線上結合到的標記抗體就越少，顯色越弱；反之，當待檢樣品中的抗原越少，結合的標記抗體越少，則T線上結合到的標記抗體就越多，顯色越強；抗原-標記抗體復合物或未結合的標記抗體與C線上的二抗結合，C線顯色。競爭法常用于檢測農藥殘留、重金屬離子、真菌毒素等。

目前，用于免疫層析技術的標記物主要為膠體金，其存在無法定量的缺點。因此，需要一種能夠新的定量跟蹤的標記物，同時，能保持快速測定、操作簡便的優點。

發明內容

本發明的目的是針對上述技術現狀，提供一種藻紅蛋白熒光探針及其用于黃曲霉毒素B1快速檢測的方法。本發明的檢測方法操作簡單快捷，適用于現場大批量樣品的快速檢測。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種藻紅蛋白熒光探針的制備方法，按摩爾比為10~1:1往pH 為4.0~8.0、濃度為0.01~0.2 M磷酸鹽緩沖液中加入藻紅蛋白和黃曲霉毒素B1單克隆抗體，振蕩混勻；然后加入體積分數為0.02%~0.6%的戊二醛，振蕩混勻后，在避光、溫度為5~50℃的條件下，勻速振蕩反應2~20 h，得到藻紅蛋白熒光探針。

一種如上所述的制備方法制得的藻紅蛋白熒光探針中，含有1~10 μg/mL黃曲霉毒素B1單克隆抗體。

一種將上述的藻紅蛋白熒光探針用于黃曲霉毒素B1快速檢測的方法，包括以下步驟：

1）取10~100 μL、0.1-30ng/mL的黃曲霉毒素B1待測樣品，加入藻紅蛋白熒光探針10~80μL，混勻，反應1~10 min；

2）將步驟1）的反應液滴加至檢測卡孔中，層析時間為3~15 min，然后將檢測卡放入熒光免疫層析快速檢測設備中進行檢測。