[發明專利]一種藻藍蛋白熒光探針及其用于黃曲霉毒素B1快速檢測的方法

在審

• 申請號: 201810543859.5
• 申請日: 2018-05-31
• 公開（公告）號: CN108732346A
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發明（設計）人: 鄭允權;莫柳達;張文怡;黃劍東;郭養浩;石賢愛
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/577;G01N33/533;G01N33/544;G01N33/569
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊;李翠娥

本發明提供了一種藻藍蛋白熒光探針及其用于黃曲霉毒素B1快速檢測的方法。將熒光藻藍蛋白與黃曲霉毒素B1單克隆抗體進行偶聯制成熒光探針，并將其應用于試紙條快速檢測中，基于競爭免疫層析法原理，建立一種黃曲霉毒素B1快速測定的方法。本發明的快速檢測試紙條操作簡單快捷，適用于現場大批量樣品的快速檢測。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種藻藍蛋白熒光探針及其用于黃曲霉毒素B1快速檢測的方法。

背景技術

藻藍蛋白是從藻類分離出來的一種天然色素蛋白，不僅可作為天然藍色色素用于食品、保健品、化妝品等領域，而且，藻藍蛋白還具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤和提高免疫等生理功能而廣泛應用于醫藥保健領域。同時，藻藍蛋白因其強烈的熒光性能可制成熒光試劑探針和熒光示蹤劑，用于醫療診斷、免疫學、生物工程和其他研究領域。相對于其他熒光素，藻藍蛋白具有摩爾消光系數大、熒光量子產率高以及斯托克斯位移大的特點，其脫輔基蛋白鏈含有氨基和羧基可以與其他分子成鍵，并同時保持兩種分子的生物學活性。

免疫層析技術（immunochromatography）是近20世紀末發展起來的一種分析方法，具有特異性、操作簡單、快速等優點，因而成為環境保護、食品安全快速檢測分析研究的熱點。

根據待檢物質和抗體不同的結合模式，可將免疫層析技術分為直接法和競爭法。直接法用于檢測多抗原位點的生物大分子，如人類、動物疫病的早期診斷、生化分析、抗體水平監測。競爭法用于抗原結合位點少或僅具有單個抗原結合位點的小分子化合物，多采用標記抗體模式。

競爭法的工作原理為：在毛細管作用力下，待檢物質先與結合墊處的標記抗體進行識別而結合，形成抗原-標記抗體復合物繼續向前層析，到達T線時，未結合的標記抗體繼續與T線的偶聯抗原結合形成偶聯抗原-標記抗體復合物而顯色，當待檢樣品中的抗原越多，結合的標記抗體越多，則T線上結合到的標記抗體就越少，顯色越弱；反之，當待檢樣品中的抗原越少，結合的標記抗體越少，則T線上結合到的標記抗體就越多，顯色越強；抗原-標記抗體復合物或未結合的標記抗體與C線上的二抗結合，C線顯色。競爭法常用于檢測農藥殘留、重金屬離子、真菌毒素等。

目前，用于免疫層析技術的標記物主要為膠體金，其存在無法定量的缺點。因此，需要一種能夠新的定量跟蹤的標記物，同時，能保持快速測定、操作簡便的優點。

發明內容

本發明的目的是針對上述技術現狀，提供一種藻藍蛋白熒光探針及其用于黃曲霉毒素B1快速檢測的方法。本發明的檢測方法操作簡單快捷，適用于現場大批量樣品的快速檢測。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種藻藍蛋白熒光探針的制備方法：按摩爾比為10~1:1往pH 為5.0~8.5、濃度為0.01~0.2 M的PBS緩沖液中加入藻藍蛋白和黃曲霉毒素B1單克隆抗體，振蕩混勻，向反應體系中加入體積分數為0.01%~0.5%的交聯劑戊二醛，振蕩混勻，于10~45℃搖床中勻速振蕩，避光反應2~20 h。

一種如上所述的制備方法制得的藻藍蛋白熒光探針，含1~10 μg/mL黃曲霉毒素B1單克隆抗體。

一種將上述的藻藍蛋白熒光探針用于黃曲霉毒素B1快速檢測的方法，包括以下步驟：

1）用移液槍吸取20~100 μL、0.1-30ng/mL的黃曲霉毒素B1待測樣品，再加入10~70 μL含1~10 μg/mL黃曲霉毒素B1單克隆抗體的藻藍蛋白熒光探針，混勻，競爭反應2~12 min；

2）將步驟1）的反應液滴加至檢測卡孔中，層析時間為5~12 min，將檢測卡放入熒光免疫層析快速檢測設備中進行檢測。