[發(fā)明專利]一種藻藍(lán)蛋白熒光探針及其用于黃曲霉毒素B1快速檢測的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810543859.5
• 申請日: 2018-05-31
• 公開（公告）號: CN108732346A
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄭允權(quán);莫柳達(dá);張文怡;黃劍東;郭養(yǎng)浩;石賢愛
• 申請（專利權(quán)）人: 福州大學(xué)
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/577;G01N33/533;G01N33/544;G01N33/569
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊;李翠娥

1.一種藻藍(lán)蛋白熒光探針的制備方法，其特征在于：按摩爾比為10~1:1往pH 為5.0~8.5、濃度為0.01~0.2 M的PBS緩沖液中加入藻藍(lán)蛋白和黃曲霉毒素B1單克隆抗體，振蕩混勻，向反應(yīng)體系中加入體積分?jǐn)?shù)為0.01%~0.5%的交聯(lián)劑戊二醛，振蕩混勻，于10~45℃搖床中勻速振蕩，避光反應(yīng)2~20 h。

2.一種如權(quán)利要求1所述的制備方法制得的藻藍(lán)蛋白熒光探針，其特征在于：所述的藻藍(lán)蛋白熒光探針含1~10 μg/mL黃曲霉毒素B1單克隆抗體。

3.一種將權(quán)利要求2所述的藻藍(lán)蛋白熒光探針用于黃曲霉毒素B1快速檢測的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1）用移液槍吸取20~100 μL、0.1-30ng/mL的黃曲霉毒素B1待測樣品，再加入10~70 μL藻藍(lán)蛋白熒光探針，混勻，競爭反應(yīng)2~12 min；

2）將步驟1）的反應(yīng)液滴加至檢測卡孔中，層析時間為5~12 min，將檢測卡放入熒光免疫層析快速檢測設(shè)備中進(jìn)行檢測。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藻藍(lán)蛋白熒光探針用于黃曲霉毒素B1快速檢測的方法，其特征在于：步驟2）所述檢測卡的制備方法為：取0.01 mol/L、pH=7.0 PBS緩沖液分別稀釋牛血清蛋白偶聯(lián)黃曲霉毒素B1抗原和羊抗鼠二抗分別至0.01~5 mg/L和0.05~10 mg/L，用劃膜器具均勻地畫在NC膜上，分別為檢測線和質(zhì)控線，于室溫下干燥2~12 h；將NC膜、樣品墊、吸水墊依次組裝在塑料底板上，裝入檢測卡，并放入密封袋中于4℃下保存以備用。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藻藍(lán)蛋白熒光探針用于黃曲霉毒素B1快速檢測的方法，其特征在于：步驟2）所述的熒光免疫層析快速檢測設(shè)備，設(shè)置參數(shù)如下：LED燈濾光片波長為500~600 nm；相機(jī)濾光片的中心波長為600~750 nm。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藻藍(lán)蛋白熒光探針用于黃曲霉毒素B1快速檢測的方法，其特征在于：步驟2）所述的熒光免疫層析快速檢測設(shè)備設(shè)定以下檢測條件：LED燈的電壓和電流分別為0.1~10 V和0.1~100 mA；相機(jī)的曝光時間為0.1~10 s。