[發明專利]一種快速檢測溶血性曼氏桿菌的PCR擴增引物及其應用在審
| 申請號： | 201810543513.5 | 申請日： | 2018-05-31 |
| 公開（公告）號： | CN108728558A | 公開（公告）日： | 2018-11-02 |
| 發明（設計）人： | 李軍;吳翠蘭;彭昊;潘艷;馮世文;陶立;李常挺;胡帥;馬春霞;謝永平;鐘舒紅;賀會利 | 申請（專利權）人： | 廣西壯族自治區獸醫研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 廣州市紅荔專利代理有限公司 44214 | 代理人： | 李彥孚;何承鑫 |
| 地址： | 530001 廣西壯族*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 溶血性曼氏桿菌 快速檢測 核苷酸序列 分子生物學技術 特異性和敏感性 流行病學調查 傳統鑒別 檢測工具 檢測結果 上游引物 下游引物 可信度 試劑盒 引物 制備 耗時 應用 費力 檢測 基層 | ||
1.一種快速檢測溶血性曼氏桿菌的PCR擴增引物，其特征在于，所述PCR擴增引物由具有SEQ ID NO:1 所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO:2 所示核苷酸序列的下游引物組成。
2.根據權利要求1所述快速檢測溶血性曼氏桿菌的PCR擴增引物，其特征在于，所述的PCR擴增引物是依據溶血性曼氏桿菌gcp基因進行設計，擴增的目的片段大小為220 bP。
3.根據權利要求1或2所述快速檢測溶血性曼氏桿菌的PCR擴增引物，其特征在于，所述PCR 擴增引物在制備檢測溶血性曼氏桿菌試劑盒的應用。
4.一種如權利要求1所述快速檢測溶血性曼氏桿菌的PCR擴增試劑盒，其特征在于，所述PCR擴增試劑盒包括具有SEQ ID NO:1 所示核苷酸序列的上游引物以及具有SEQ ID NO:2 所示核苷酸序列的下游引物。
5.根據權利要求4所述快速檢測溶血性曼氏桿菌的PCR擴增試劑盒，其特征在于，所述PCR擴增試劑盒還包括PCR預混液和RNase-Free water；所述的PCR預混液由PCR Buffer、dNTPs、ES-Taq DNA組成。
6.根據權利要求4所述快速檢測溶血性曼氏桿菌的PCR擴增試劑盒，其特征在于，所述PCR擴增試劑盒的SEQ ID NO:1引物和SEQ ID NO:2引物使用濃度為25 pmol/μL。
7.根據權利要求4或5所述快速檢測溶血性曼氏桿菌的PCR擴增試劑盒，其特征在于，所述PCR擴增試劑盒中PCR反應程序為95℃ 5 min；隨后進行35個95℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃30 s的循環；最后72℃延伸5 min。
8.根據權利要求4或5所述快速檢測溶血性曼氏桿菌的PCR擴增試劑盒，其特征在于，所述PCR擴增試劑盒的結果判定是采用瓊脂糖凝膠電泳檢測的方法：將PCR擴增產物在1.5％的瓊脂糖凝膠上進行電泳，觀察是否有目的條帶；首先陽性對照和陰性對照成立，如果從樣品中擴增出了220 bp的特異性條帶，則說明該樣品存在溶血性曼氏桿菌；如果樣品沒有擴增出220 bp的特異性條帶，則說明該樣品不含有溶血性曼氏桿菌。
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