[發(fā)明專利]一種快速檢測肺炎克雷伯氏菌的PCR擴(kuò)增引物及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810543504.6
• 申請日: 2018-05-31
• 公開（公告）號(hào): CN108531629A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李軍;吳翠蘭;彭昊;潘艷;馮世文;陶立;李常挺;馬春霞;謝永平;鐘舒紅;胡帥;賀會(huì)利
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/689
• 分類號(hào): C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/22
• 代理公司: 廣州市紅荔專利代理有限公司 44214
• 代理人: 李彥孚;何承鑫

1.一種快速檢測肺炎克雷伯氏菌的PCR擴(kuò)增引物，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增引物由具有SEQ ID NO:1 所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO:2 所示核苷酸序列的下游引物組成。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述快速檢測肺炎克雷伯氏菌的PCR擴(kuò)增引物，其特征在于，所述的PCR擴(kuò)增引物是依據(jù)肺炎克雷伯氏菌的phoE基因進(jìn)行設(shè)計(jì)，擴(kuò)增的目的片段大小為571 bp。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述快速檢測肺炎克雷伯氏菌的PCR擴(kuò)增引物，其特征在于，所述的PCR擴(kuò)增引物在制備檢測肺炎克雷伯氏菌試劑盒的應(yīng)用。

4.一種如權(quán)利要求1所述快速檢測肺炎克雷伯氏菌的PCR擴(kuò)增試劑盒，其特征在于，包括具有SEQ ID NO:1 所示核苷酸序列的上游引物以及具有SEQ ID NO:2 所示核苷酸序列的下游引物。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述快速檢測肺炎克雷伯氏菌的PCR擴(kuò)增試劑盒，其特征在于，還包括10×PCR Buffer、dNTPs、ES-Taq DNA聚合酶和RNase-Free water。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述快速檢測肺炎克雷伯氏菌的PCR擴(kuò)增試劑盒，其特征在于，所述的10×PCR Buffer包含KCL 20-30 mM、MgSO₄ 3-10 mM、10-20 mM Tris-HCL。

7.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述快速檢測肺炎克雷伯氏菌的PCR擴(kuò)增試劑盒，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增試劑盒的SEQ ID NO:1引物和SEQ ID NO:2引物使用濃度為25 pmol/μL。

8.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述快速檢測肺炎克雷伯氏菌的PCR擴(kuò)增試劑盒，其特征在于，所述的PCR擴(kuò)增試劑盒中PCR反應(yīng)程序?yàn)?5 ℃ 5 min；隨后進(jìn)行35個(gè)95 ℃ 35 s，58 ℃ 40s，72 ℃ 45 s的循環(huán)；最后72 ℃延伸10 min。