[發明專利]一種雜交鵝掌楸親緣關系的鑒定方法

有效

• 申請號: 201810543423.6
• 申請日: 2018-05-29
• 公開（公告）號: CN108660196B
• 公開（公告）日: 2019-09-10
• 發明（設計）人: 陳金慧;龍曉飛;施季森;成鐵龍;肖保榮;劉思芹;翁禹豪;胡凌峰;劉陽
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686;C12Q1/6895
• 代理公司: 南京申云知識產權代理事務所(普通合伙) 32274
• 代理人: 邱興天

本發明公開了一種雜交鵝掌楸親緣關系的鑒定方法及其專用試劑盒，該方法包括：1)提取雜交鵝掌楸葉片DNA；2)進行PCR檢測；3)用引物18.2能特異性擴增出400bp的產物的母本為中國鵝掌楸，能特異性擴增出382bp的產物母本為北美鵝掌楸，再用引物700對中國鵝掌楸的進行PCR擴增，能特異性擴增出700bp產物的母本為中國鵝掌楸西部種源，能特異擴增出242bp產物的母本則為中國鵝掌楸東部種源；對北美鵝掌楸的用引物700進行PCR擴增，均特異獲得700bp的產物。本發明可對幼苗階段的雜交鵝掌楸天然林進行有效鑒定，具有速度快，效率高，結果準確，重復性與穩定性好等優點。

技術領域

本發明屬于樹種鑒定技術領域，具體涉及一種雜交鵝掌楸親緣關系的鑒定方法。

背景技術

鵝掌楸屬(Liriodendron L.)是木蘭科(Magnoliaceae)植物，屬古老屬種之一。現包括三個種：中國鵝掌楸(Liriodendron chinense(Hemsl.)Sarg.)，北美鵝掌楸(Liriodendron tulipifera Linn.)以及兩者雜交種雜交鵝掌楸Liriodendron chinense×tulipifera。鵝掌楸屬植物是研究植物進化歷史進程的理想材料，具有重要的研究意義。

中國鵝掌楸樹干通直，可用作木材，馬褂形三裂葉片，具有較高的觀賞價值屬于國家二級珍稀瀕危保護植物。北美鵝掌楸材質優良，淡黃褐色，紋理密致美觀，切削性光滑，易施工，為船艙，火車內部裝修及室內高級家具用材，為美國重要用材樹種之一。雜交鵝掌楸具雜交優勢，抗逆性與生長特性均明顯優于中國種和美國種。但由于鵝掌楸屬植物自然授粉不良，發芽率低，現在得到雜交種的方式主要為人工授粉或嫁接繁殖。現有的方法都相對來說比較繁雜，人們一直在尋找更加方便有效的方法。

傳統的雜交鵝掌楸親緣關系鑒定主要是利用形狀表現上的差異進行識別和區分，例如形態學、解剖學和同工酶酶譜等方法，但是形態標記受環境影響較大，同工酶標記也受基因表達的影響而限制其使用。SSR分子標記的出現一定程度上解決了部分親緣關系鑒定的困難，但是仍存在親緣關系鑒定精度不高等不足，仍不能滿足需要。

發明內容

發明目的：針對現有技術中存在的不足，本發明的目的是提供一種雜交鵝掌楸親緣關系鑒定方法，可對幼苗階段的雜交鵝掌楸天然林進行有效鑒定，速度快，效率高，結果準確。

技術方案：為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案為：

一種雜交鵝掌楸親緣關系鑒定方法，包括以下步驟：

1)提取后代樹種的葉片DNA；

2)進行PCR檢測；

3)用引物18.2能特異性擴增出400bp的產物的母本為中國鵝掌楸，能特異性擴增出382bp的產物母本為北美鵝掌楸；

4)再用引物700對已鑒別為母本為中國鵝掌楸的進行PCR擴增，能特異性擴增出700bp產物的母本為中國鵝掌楸西部種源，能特異擴增出242bp產物的母本則為中國鵝掌楸東部種源；對已鑒別為母本為北美鵝掌楸的用引物700進行PCR擴增，均特異獲得700bp的產物。

步驟1)中，葉片為剛展開的嫩葉，液氮處理后放置-80℃備用。

步驟2)中，DNA提取采用CTAB法進行。