[發明專利]一種轉氨酶、突變體及其生產L-草銨膦的應用

有效

• 申請號: 201810540980.2
• 申請日: 2018-05-30
• 公開（公告）號: CN108660122B
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 金利群;鄭裕國;彭鳳;程峰;柳志強;薛亞平;賈東旭
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/04;C12R1/19
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

1.一種來源于假單胞桿菌（Pseudomonas fluorescens）的轉氨酶，其特征在于所述轉氨酶的氨基酸序列為SEQ ID NO：2所示。

2.一種權利要求1所述轉氨酶的編碼基因，其特征在于所述編碼基因核苷酸序列為SEQID NO：1所示。

3.一種權利要求2所述轉氨酶的編碼基因構建的重組基因工程菌。

4.一種權利要求1所述轉氨酶在催化2-羰基-4-(羥基甲基膦酰基) -丁酸合成L-草銨膦中的應用。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述的應用以含轉氨酶編碼基因的工程菌經發酵培養獲得的濕菌體為催化劑，以2-羰基-4-(羥基甲基膦酰基) -丁酸為底物，以磷酸吡哆醛為輔酶，加入氨基供體，于pH值為6~9的緩沖液中構成轉化體系，在30~50 ℃、600 rpm條件下反應，反應完全，將反應液分離純化，獲得L-草銨膦；所述氨基供體為L-谷氨酸、L-天冬氨酸或L-丙氨酸；所述轉化體系中，催化劑的用量以濕菌體重量計為20~60 g/L，所述底物的初始濃度為20~100 mM，所述輔酶的用量為0.02~2 mM，所述氨基供體用量為10~80 mM。

6.如權利要求5所述的應用，其特征在于所述濕菌體按如下方法制備：將含有轉氨酶基因的工程菌接種至含有終濃度50 μg/mL卡那霉素抗性的LB液體培養基，37 ℃、200 rpm下培養9 h，再以體積濃度1%接種量接種至新鮮的含有終濃度50 μg/mL卡那霉素抗性的LB液體培養基中，于37 ℃、150 rpm下培養至菌體OD₆₀₀達0.6~0.8，加入終濃度為0.1 mM的IPTG，28 ℃下誘導培養12 h后，4 ℃、8000 rpm離心10 min，棄去上清液，收集濕菌體。