[發明專利]一種香豆素半抗原與抗原的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201810538377.0
• 申請日: 2018-05-30
• 公開（公告）號: CN108840848B
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發明（設計）人: 陳黎;劉惠民;崔華鵬;樊美娟;趙樂;潘立寧;王洪波;郭軍偉;秦亞瓊
• 申請（專利權）人: 中國煙草總公司鄭州煙草研究院
• 主分類號: C07D311/12
• 分類號: C07D311/12;G01N33/577;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司 41110
• 代理人: 姜振東

1.一種香豆素半抗原的制備方法，其特征在于：是由香豆素進行縮醛反應得到的，其分子結構式為：

具體步驟如下：

1）取香豆素1.00 g，加入80 mL氯苯中攪拌溶解，加2.50 g叔丁醇過氧化氫，攪拌充分混勻，加3-(1,3-二氧雜烷-2-基)丙醛0.89 g，100℃攪拌24 h；停止反應后，加100 mL冷水，用100 mL乙酸乙酯萃取3次，使用50 mL水洗，有機相無水硫酸鈉干燥蒸干，60 mL石油醚/二氯甲烷重結晶，得到縮醛香豆素化合物1.70 g，石油醚與二氯甲烷的v/v為1/1；

2）取縮醛香豆素1.70 g，加20 mL乙腈溶解，加1 mol/L稀鹽酸10 mL，室溫劇烈攪拌4h，停止反應，旋蒸，除去乙腈，加水50 mL，加1mol/L的NaOH調節pH值到6，加70 mL 1,2-二氯乙烷萃取3次，100 mL水洗，蒸干，上硅膠柱，2 L二氯甲烷/甲醇洗脫，分離純化，得到丁醛香豆素半抗原1.30 g，二氯甲烷與甲醇的v/v為5/1。

2.如權利要求1所述方法制備的香豆素半抗原的應用，其特征在于：所述香豆素半抗原可用于制作動物免疫的抗原體系原料。

3.一種香豆素抗原的制備方法，其特征在于：是由權利要求1制得的香豆素半抗原與載體蛋白偶聯得到。

4.如權利要求3所述的香豆素抗原的制備方法，其特征在于：所述載體蛋白為牛血清白蛋白、卵清蛋白、鑰孔血藍蛋白或人血清白蛋白。

5.如權利要求3所述的香豆素抗原的制備方法，其特征在于：具體步驟如下：取香豆素半抗原16 mg，加乙醇溶解，得到A液，取牛血清白蛋白0.1 g，加pH值為5.6的醋酸鹽緩沖液溶解，得到B液，將A液滴加到B液中，4℃攪拌20 h，加1 mg硼氫化鈉，繼續攪拌2 h，0.02mol/L PB透析純化三天，每天換液三次，得香豆素抗原；分裝， -20℃保存備用。

6.如權利要求3所述的香豆素抗原的制備方法，其特征在于：具體步驟如下：取香豆素半抗原5 mg，加乙醇溶解，得到A液，取卵清白蛋白50 mg，加pH值為9.1的碳酸鹽緩沖液溶解，得到B液，將A液滴加到B液中，4℃攪拌20 h，加1 mg硼氫化鈉，繼續攪拌2 h，0.02 mol/LPB透析純化三天，每天換液三次，得香豆素抗原；分裝，-20℃保存備用。

7.如權利要求3所述方法制備的香豆素抗原的應用，其特征在于：采用香豆素抗原免疫動物得到的單克隆抗體，可用于制備檢測香豆素的酶聯免疫試劑盒、膠體金試紙條和時間分辨熒光免疫層析試紙條，從而實現煙草、香精香料及食品中香豆素的快速檢測。