[發明專利]辣椒輕斑駁病毒侵染性克隆的Cre-LoxP重組系統及其應用

有效

• 申請號: 201810537608.6
• 申請日: 2018-05-30
• 公開（公告）號: CN110144364B
• 公開（公告）日: 2023-05-12
• 發明（設計）人: 彭杰軍;鄭紅英;趙晉平;錢靖;燕飛;魯宇文;林林;程曄;陳劍平
• 申請（專利權）人: 寧波大學;浙江省農業科學院
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/65;C12N15/66
• 代理公司: 杭州天昊專利代理事務所(特殊普通合伙) 33283
• 代理人: 向慶寧

1.一種辣椒輕斑駁病毒PMMoV-GFP侵染性克隆的Cre-LoxP重組系統，其特征在于，所述Cre-LoxP重組系統包括pJM23載體、pJG102載體和pCre載體；

所述pJM23載體的核苷酸序列如SEQ?ID?No.14所示；

所述pJG102載體的核苷酸序列如SEQ?ID?No.15所示；

所述pCre載體由Cre序列融入雙元表達載體構建得到。

2.根據權利要求1所述的PMMoV-GFP侵染性克隆的Cre-LoxP重組系統，其特征在于，所述Cre-LoxP重組系統的構建方法包括以下步驟：

(1)獲得PMMoV-GFP侵染性克隆的核苷酸全序列；

(2)設計引物pJM23-1?f，pJM23-1?r，pJM23-2?f，pJM23-2?r，pCB301-full?f和pCB301-full?r；擴增引入LoxP序列的目的片段pJM23-1，pJM23-2和pCB301-full；利用Vazyme的ClonExpress?MultiS?One?Step?Cloning?Kit將PCR擴增獲得的pJM23-1，pJM23-2，pCB301-full片段直接重組構建成pJM23載體；

(3)設計引物pJG102?f，pJG102?r，pCB301-102?f和pCB301-102?r；擴增引入LoxP序列的目的片段pJG102和pCB301-102；利用Vazyme的ClonExpress?II?One?Step?Cloning?Kit將PCR擴增獲得的pJG102，pCB301-102片段直接重組構建成pJG102載體；

(4)設計引物pCre?f和pCre?r；擴增Cre基因片段；利用XbaI和SacI雙酶切后連入雙元表達載體構建得到pCre載體；

(5)將上述三種載體采用農桿菌介導法共轉化本氏煙，體內Cre基因表達后獲得重組的PMMoV-GFP侵染性克?。?/p>

其中，所述引物pCB301-full?f，pCB301-full?r，pJM23-1?f，pJM23-1?r，pJM23-2?f，pJM23-2r，pJG102?f，pJG102?r，pCre?f，pCrer?r，pCB301-102?f和pCB301-102?r的堿基序列分別如SEQ?ID?No.2～SEQ?ID?No.13所示。

3.一種辣椒輕斑駁病毒PMMoV-GFP侵染性克隆的Cre-LoxP重組系統，其特征在于，所述Cre-LoxP重組系統包括pJM23載體和pGJ2303載體；

所述pJM23載體的核苷酸序列如SEQ?ID?No.14所示；所述pJG2303載體由pJG102載體和35S-Cre-RZ-NOS融合而成，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.16所示。