[發(fā)明專(zhuān)利]一株產(chǎn)核酸釀酒酵母工程菌及其構(gòu)建方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810537366.0
• 申請(qǐng)日: 2018-05-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108660085B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭學(xué)武;倪曉豐;王東旭;肖冬光;陳葉福;趙賓
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/19
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/19;C12N15/81;C12P19/34;C12R1/865
• 代理公司: 北京瑞盛銘杰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11617
• 代理人: 栗華楠

本發(fā)明提供了一種產(chǎn)核酸的釀酒酵母菌株及其構(gòu)建方法與應(yīng)用，包括基因過(guò)表達(dá)以及選育菌株的發(fā)酵驗(yàn)證。以Pep1基因?yàn)槟康幕颍x育的酵母菌株對(duì)釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)液泡蛋白分選受體Pep1進(jìn)行過(guò)表達(dá)，與親本菌株相比，所構(gòu)建的釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌株基本發(fā)酵性能不受影響，搖瓶發(fā)酵后，選育菌株核酸含量達(dá)14.70％，親本菌株核酸含量為9.32％，選育菌株相比較親本菌株提高了57.72%。選育的釀酒酵母菌株顯著提高核酸含量，在酵母及核酸產(chǎn)業(yè)廣泛的應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，涉及工業(yè)微生物的育種，特別是一種產(chǎn)核酸的釀酒酵母工程菌。

背景技術(shù)

核酸酵母工業(yè)是我國(guó)新興產(chǎn)業(yè)。核糖核酸(簡(jiǎn)稱(chēng)核酸,RNA)廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)、醫(yī)藥工業(yè)和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上。在食品工業(yè)方面,核酸是開(kāi)發(fā)新型食品調(diào)味品必不可少的原料。風(fēng)行世界的第二代味精(強(qiáng)力味精)、第三代味精(風(fēng)味味精)、特鮮醬油等新型調(diào)味品,都是核酸及其衍生物應(yīng)用的結(jié)果。在醫(yī)藥工業(yè)上,核酸是制造治療冠心病、腫瘤、心肌梗塞等疾病藥物的原料。在農(nóng)業(yè)上,核酸及其衍生物廣泛用作農(nóng)作物(如水稻、瓜果、豆類(lèi)等)的生長(zhǎng)促進(jìn)物質(zhì)。

釀酒酵母胞內(nèi)RNA主要包括：信使RNA，核糖體RNA，轉(zhuǎn)運(yùn)RNA和非編碼RNA。其中核糖體RNA是其中含量最多的一類(lèi)RNA，占RNA總量的82％左右，也是其中相對(duì)分子質(zhì)量最大的一類(lèi)RNA。所以增加胞內(nèi)核糖體RNA的產(chǎn)量或者生成速率是一種有效的選育高核酸釀酒酵母的方法。

近年來(lái)隨著對(duì)食品安全性的考慮，越來(lái)越多的研究集中在選育高核酸釀酒酵母的工作方面，而非假絲酵母等不屬于 GRAS(Generally recognized as safe)的菌株。

楊依順, 丁玥, 曹靜,等. 釀酒酵母發(fā)酵制備RNA的研究[J]. 藥物生物技術(shù),2013(4):310-313.利用氯化鉀敏感性，通過(guò)DES化學(xué)誘變，篩選一株釀酒酵母，RNA含量提高了25％。

文章Chuwattanakul V, Kim Y H, Sugiyama M, et al. Construction of aSaccharomyces cerevisiae strain with a high level of RNA.[J]. Journal ofBioscience Bioengineering, 2011, 112(1):1通過(guò)敲除釀酒酵母中RRN10基因，然后通過(guò)EMS誘變篩選獲得回復(fù)突變株，最后通過(guò)在突變株內(nèi)整合表達(dá)RRN10基因，獲得高產(chǎn)核酸的酵母菌株，使核酸含量提高了30％。

文章Peterson M R, Emr S D. The class C Vps complex functions atmultiple stages of the vacuolar transport pathway.[J]. Traffic, 2001, 2(7):476-486，曾經(jīng)公開(kāi)了