[發明專利]用于核苷酸序列修飾的組合物、方法與應用

有效

• 申請號: 201810535575.1
• 申請日: 2018-05-29
• 公開（公告）號: CN108707635B
• 公開（公告）日: 2022-02-15
• 發明（設計）人: 李大力;張曉輝;朱碧云;劉明耀;席在喜
• 申請（專利權）人: 華東師范大學;上海邦耀生物科技有限公司
• 主分類號: C12P19/34
• 分類號: C12P19/34;C12N15/63;C12Q1/6806
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 李青

1.一種用于核苷酸序列修飾的組合物，其特征在于，

其包括：第一載體和第二載體；

其中，所述第一載體包括5’-3’的式（I）結構：

P_II-X1-L1-X2-PolyA 式（I）；

式（I）中，P_II為II型啟動子；X1為突變型Cas9（D10A）核酸酶的編碼序列；X2為多肽表位的編碼序列，L1為無或連接序列；各“-”獨立地為鍵或核苷酸連接序列；

其中，所述第二載體包括5’-3’的式（II）結構：

P_III-Y1-P_II-Y2-L2-Y3 式（II）；

式（II）中，P_III為III型啟動子；Y1為sgRNA的骨架序列；P_II為II型啟動子；Y2為多肽表位的單鏈抗體結合域的編碼序列；L2為無或連接序列；Y3為胞嘧啶脫氨酶與尿嘧啶糖苷酶抑制劑融合編碼序列；各“-”獨立地為鍵或核苷酸連接序列；

Y3的連接順序如下：胞嘧啶脫氨酶-尿嘧啶糖苷酶抑制劑-野生型腺苷脫氨酶-突變型腺苷脫氨酶；

所述多肽表位為GCN4，所述單鏈抗體結合域為GCN4單鏈抗體結合域；

所述多肽表位的數量為5-10個；

X2的序列如SEQ ID NO.1所示，Y2的序列如SEQ ID NO.2所示， Y3中胞嘧啶脫氨酶的核酸編碼序列如SEQ ID NO.3所示，Y3中尿嘧啶糖苷酶抑制劑的編碼序列如SEQ ID NO.4所示，Y3中腺苷脫氨酶的核酸編碼序列如SEQ ID NO.5所示，Y3中突變型腺苷脫氨酶的核酸編碼序列如SEQ ID NO.6所示。

2.一種修飾核苷酸序列的方法，其特征在于，其包括：

給予對象施加權利要求1所述的組合物，所述方法以非疾病的治療為目的。

3.權利要求1所述的用于核苷酸序列修飾的組合物在構建有基因突變導致的疾病動物模型、基因功能篩選或藥物篩選中應用。