[發明專利]一種檢測苯丙胺的試紙條及其制備方法和應用方法

在審

• 申請號: 201810532305.5
• 申請日: 2018-05-29
• 公開（公告）號: CN108845152A
• 公開（公告）日: 2018-11-20
• 發明（設計）人: 賈嘉;張振興;呂小翠;趙琳;周亮;崔浩哲;張鵬;高翔
• 申請（專利權）人: 鄭州左安檢測科技有限公司
• 主分類號: G01N33/94
• 分類號: G01N33/94;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/533
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 趙娟

1.一種檢測苯丙胺的試紙條，包括樣品吸收墊、結合物釋放墊、反應膜、吸水墊和底板；其特征在于：所述結合物釋放墊上噴涂有時間分辨熒光微球標記的抗體；所述反應膜上包被有半抗原-載體蛋白偶聯物的檢測線和羊抗鼠二抗的質控線。

2.根據權利要求1所述的試紙條，其特征在于：所述樣品吸收墊、結合物釋放墊、反應膜和吸水墊均粘貼在底板上且中任意相鄰兩個沿上下方向部分疊加，結合物釋放墊的1/3-1/2被覆蓋于樣品吸收墊下。

3.根據權利要求1所述的試紙條，其特征在于：所述時間分辨熒光微球是直徑為100nm-500 nm的稀土離子作為標記物的熒光微球，其表面修飾有功能基團，用于蛋白、抗體和核酸的共價偶聯。

4.根據權利要求3所述的試紙條，其特征在于：所述時間分辨熒光微球的激發波長為300-400 nm，發射波長為500-700 nm。

5.根據權利要求1所述的試紙條，其特征在于：所述結合物釋放墊為玻璃纖維或聚酯材料。

6.根據權利要求1所述的試紙條，其特征在于：所述反應膜為硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜。

7.一種制備權利要求1-6任一項所述試紙條的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）用熒光微球標記苯丙胺抗體，并將其噴涂在結合物釋放墊上，以制備噴涂有苯丙胺單克隆抗體-熒光微球標記物的結合物釋放墊；

2）將半抗原-載體蛋白偶聯物和羊抗鼠二抗分別噴涂于反應膜上作為檢測線（T）和質控線（C）；

3）將1）和2）制備好的結合物釋放墊、反應膜與樣品吸收墊、吸水墊和底板組裝成試紙條。

8.根據權利要求7所述的制備試紙條的方法，其特征在于：在步驟1）中取出熒光微球進行活化，然后加入苯丙胺抗體進行共價偶聯，結束后加入封閉緩沖液進行封閉，離心洗滌后4℃保存備用。

9.根據權利要求7所述的制備試紙條的方法，其特征在于：在步驟1）中的結合物釋放墊用含0.2-1%牛血清白蛋白（質量分數）、pH 7.4的0.02-0.05 mol/L Tris-HCl（含0.1-5 %的海藻糖和0.02-0.1% Tween-20）緩沖液浸泡2 h，37℃下烘干2 h，置于干燥環境中保存備用。

10.一種應用權利要求1-6任一項所述檢測苯丙胺的試紙條檢測樣品中苯丙胺的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

1）將試紙條和待測樣品恢復至室溫；

2）開啟免疫熒光分析儀，插入對應ID卡，讀取標準曲線；

3）向試紙條的樣品孔中加入待測樣本60-120μL，反應5-10min后，將檢測卡插入免疫熒光分析儀；

4）截留在檢測線和質控線的熒光微球在最佳激發光下，發出強烈的熒光條帶；

5）采用免疫層析分析儀讀取檢測線和質控線的熒光強度，并給出T/C值，分析儀可通過內置的標準曲線計算出樣品中苯丙胺的濃度，并判斷陰陽性。