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[發明專利]一種利用響應面法結合遺傳算法和直接搜索算法優化的丹梔逍遙散的提取方法有效

專利信息
申請號: 201810531837.7 申請日: 2018-05-29
公開(公告)號: CN108714170B 公開(公告)日: 2020-12-04
發明(設計)人: 蘇本正 申請(專利權)人: 山東省中醫藥研究院
主分類號: G01N30/02 分類號: G01N30/02;G06N3/12;G16C20/10;A61K36/744;A61P1/16;A61P1/14
代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218 代理人: 李桂存
地址: 250014 山*** 國省代碼: 山東;37
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 一種 利用 響應 結合 遺傳 算法 直接 搜索 優化 逍遙 提取 方法
【權利要求書】:

1.一種利用響應面法結合遺傳算法和直接搜索算法優化的丹梔逍遙散的提取方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)選擇梔子苷、芍藥苷和丹皮酚為指標成分,采用高效液相色譜法進行指標成分含量測定;

所述高效液相色譜的條件為:色譜柱:Phenomenex Luna-C18色譜柱,250×4.60 mm,5μm;柱溫:30℃;流動相:流動相 A為乙腈,B為0.1%體積比磷酸,進行梯度洗脫;檢測波長:0~30 min內,檢測波長為240 nm、30~65 min內,檢測波長為232 nm、65~90 min內,檢測波長為274 nm;流速:1.0 mL/min;進樣量:5 μL;

所述梯度洗脫為:

(2)混合對照品溶液的制備:精密稱定梔子苷、芍藥苷及丹皮酚對照品,加適量甲醇制成終濃度分別為74.9、56.2及33.4 μg/mL的混合對照品溶液;

(3)供試品溶液的制備:分別精密稱取過4號篩的柴胡0.5 g、當歸0.5 g、茯苓0.5 g、白芍0.5 g、白術0.5 g、薄荷0.1 g、甘草0.4 g、牡丹皮0.75 g和梔子0.75 g藥材粉末組成復方,按照液料比為5-30:1mL/g加入20-80%乙醇溶液,加熱回流提取1-4次,提取時間為1.5-4h,提取液濾過后放冷、補足失重,離心,取1 mL上清液,用甲醇定容至10 mL容量瓶,微孔濾膜濾過后作為供試品溶液;

(4)標準曲線的建立:取混合對照品溶液,進行HPLC檢測,分別進樣1、2、4、6、8、10、20 μL,以質量濃度為橫坐標(x),以峰面積為縱坐標(y)進行線性回歸:梔子苷的回歸方程為y=1483728x-12051,r=0.99995;芍藥苷的回歸方程為y=927308x-20630,r=0.9975;丹皮酚的回歸方程為y=5116603x-44372,r=0.9999;

(5)實驗設計與統計分析:①單因素試驗:以乙醇濃度、水料比、提取時間及提取次數為參數進行單因素試驗,取供試品溶液進高效液相色譜儀檢測,分別測定丹梔逍遙散中梔子苷、芍藥苷及丹皮酚指標成分的含量,并進行評分,評分時以各指標的最大值為參照將數據進行歸一化,再按照各指標的權重,將梔子苷、芍藥苷和丹皮酚的權重系數定為相等,各占1/3,計算得綜合評分,評分公式為:綜合得分(Y)=(梔子苷含量/最高組梔子苷含量×1/3+芍藥苷含量/最高組芍藥苷含量×1/3+丹皮酚含量/最高組丹皮酚含量×1/3)×100;②BBD-響應面法優化分析:在單因素試驗的基礎上,使用軟件Design-Expert 8.0.5b,以丹梔逍遙散中芍藥苷、丹皮酚、梔子苷三成分的綜合評分為響應值,選取提取過程中效果顯著的乙醇濃度(A)、提取時間(B)和水料比(C)三因素為自變量,建立多元二次回歸方程:Y=-15.11647+0.40285A+2.26667B+0.28386C-0.002425AB+0.00112AC-0.01620BC-0.00339175A2-0.30017B2-0.009597C2r=0.991;

(6)遺傳算法搜索分析:以BBD二項式擬合方程為目標函數,使用軟件Matlab 2014b,采用遺傳算法搜索丹梔逍遙散中指標成分的最佳提取條件,搜索過程使用遺傳算法工具GUI,設置參數,隨機搜索10次,驗證分析;

(7)直接搜索法搜索分析:以二項式擬合方程為目標函數,使用軟件Matlab 2014b,采用直接搜索算法搜索丹梔逍遙散中指標成分的最佳提取條件,搜索過程使用模式搜索工具GUI,設置參數,隨機搜索10次,驗證分析。

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