[發明專利]一種用于檢測卵巢癌基因多態性位點的引物及其檢測方法

在審

• 申請號: 201810530234.5
• 申請日: 2018-05-29
• 公開（公告）號: CN108504741A
• 公開（公告）日: 2018-09-07
• 發明（設計）人: 陳思翔;張蓉;黃曉霞;孫正周
• 申請（專利權）人: 成都中創清科醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 成都正華專利代理事務所(普通合伙) 51229
• 代理人: 李林合

1.一種用于檢測卵巢癌基因多態性位點的引物，其特征在于，所述引物包括rs2276109位點的引物、rs2252070位點的引物、rs11782652位點的引物以及rs757210位點的引物，各引物的具體序列如下：

rs2276109-上游引物：5′-TGTCCATACTTACTTCACCA-3′；

rs2276109-下游引物：5′-TCTCCTTCTCTTTTAGTTGC-3′；

rs2252070-上游引物：5′-TGGCAAGATACTCTACCTCT-3′；

rs2252070-下游引物：5′-CTTCAGGTAGACACAAGACA-3′；

rs11782652-上游引物：5′-ATGAAAGGCACCACATT-3′；

rs11782652-下游引物：5′-GATCATTCTTACCCATTCC-3′；

rs757210-上游引物：5′-TGTGAACAGACACAATAACG-3′；

rs757210-下游引物：5′-CTGAAGGGAAGTAGAGAAGA-3′。

2.一種檢測卵巢癌基因多態性位點的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)提取受檢者全基因組DNA；

(2)以步驟(1)中所得DNA為模板，采用權利要求1中所述引物對其進行PCR擴增；

(3)回收擴增產物，并進行濃度測定，計算模板量，再次進行PCR擴增并對擴增產物進行純化，最后通過序列分析儀對SNP分型進行分析確定。

3.根據權利要求2所述的檢測卵巢癌基因多態性位點的方法，其特征在于，步驟(2)中所述PCR擴增的擴增體系為：Primer STAR MAX 12.5μL、Primer F1.5μL、Primer R 1.5μL、DNA 2μL，最后用H₂O補足至25μL。

4.根據權利要求2所述的檢測卵巢癌基因多態性位點的方法，其特征在于，步驟(2)中所述PCR擴增的反應條件為：95℃預變性5min，95℃變性10s，55℃退火10s，72℃延伸30s，35個循環，最后72℃延伸2min后于4℃保存。

5.根據權利要求2所述的檢測卵巢癌基因多態性位點的方法，其特征在于，步驟(3)中所述PCR擴增的擴增體系為：DTCS Master Mix 2.5μL、Primer R 1.0μL、模板DNA 3μL，最后用滅菌超純水補足至10μL。

6.根據權利要求2所述的檢測卵巢癌基因多態性位點的方法，其特征在于，步驟(3)中所述PCR擴增的反應條件為：94℃預變性30s，94℃變性25s，55℃退火25s，60℃延伸3min，30個循環，最后60℃延伸20min。