[發明專利]一種重組質粒pET28a-Ag43、表面展示質粒、重組工程菌及其應用

有效

• 申請號: 201810516761.0
• 申請日: 2018-05-25
• 公開（公告）號: CN108676808B
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 敬科舉;朱先峰;郭燕藍;凌雪萍
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N15/31;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種表面展示質粒，其特征在于，在重組質粒pET28a-Ag43的基礎上將Ag43編碼基因中的53-137aa或53～699aa切除，插入多克隆位點MCS；所述切除時的反應體系為目標基因片段或質粒DNA 1000ng，10×QuickCut緩沖液5μL，QuickCut酶I1～2μL，QuickCut酶II 1～2μL，總體系為50μL；所述插入多克隆位點MCS時的插入連接的反應體系為酶切目標基因片段與酶切質粒質量比為3:1,10×T4 DNA連接緩沖液2～3μL,T4 DNA連接酶2～3μL,總體系為20μL；所述重組質粒pET28a-Ag43中Ag43編碼基因插入到質粒pET28a的EcoRI和HindIII多克隆位點處；所述Ag43編碼基因具有序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。

2.一種重組工程菌，其特征在于，包含權利要求1所述的表面展示質粒。

3.權利要求2所述的重組工程菌在工程菌表面展示表達外源蛋白中的應用；

所述外源蛋白為紅色熒光蛋白、內切葡萄糖酶、甲酸脫氫酶或葡萄糖脫氫酶。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述表面展示表達外源蛋白的方法，包括如下步驟：

I)將權利要求2所述重組工程菌接種至含有50g/mL卡那霉素的LB培養基中，在36～38℃，180～220rpm，振蕩培養0.6～0.8h后加入IPTG誘導劑，得到待誘導的重組工程菌菌液；

II)將所述步驟I)的待誘導的重組工程菌菌液的溫度降低至21～23℃，誘導培養15～17h后離心，收集沉淀物。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述IPTG誘導劑在待誘導的重組工程菌菌液中的濃度為95～105μmol/L。