[發明專利]一種基于RPA技術的石渠棘球絳蟲檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201810516496.6
• 申請日: 2018-05-25
• 公開（公告）號: CN110527730B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 賈萬忠;吳燕濤;閆鴻斌;李立;朱國強;李雙男;姚剛;田文俊
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6844
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;陳曉慶

1.檢測或輔助檢測石渠棘球絳蟲的成套試劑，由引物對和探針組成；

所述引物對由引物甲和引物乙組成；所述引物對的靶序列含有特異DNA片段；所述特異DNA片段如SEQ ID No.1第44-360位所示；

所述引物甲如SEQ ID No.2所示；

所述引物乙如SEQ ID No.3所示；

所述探針依次由DNA片段甲、四氫呋喃和DNA片段乙組成；

所述DNA片段甲如SEQ ID No.4所示；

所述DNA片段乙如SEQ ID No.5所示。

2.根據權利要求1所述的成套試劑，其特征在于：所述引物甲、所述引物乙和所述探針的摩爾量比為7:7:2。

3.根據權利要求1或2所述的成套試劑，其特征在于：

所述DNA片段甲自5’端起最后一位堿基被熒光基團修飾；

所述DNA片段乙自5’端起第一位堿基被淬滅基團修飾。

4.一種檢測或輔助檢測石渠棘球絳蟲的RPA試劑盒，包括權利要求1中所述的引物對或權利要求1-3任一所述的成套試劑。

5.權利要求1-3任一所述的成套試劑或權利要求4所述的試劑盒在如下A1）-A3）中任一種中的應用：

A1）制備檢測或輔助檢測石渠棘球絳蟲的產品；

A2）制備檢測或輔助檢測待測樣品是否感染石渠棘球絳蟲的產品；

A3）制備檢測或輔助檢測待測病原體是否為石渠棘球絳蟲的產品。

6.一種檢測或輔助檢測待測樣品是否感染石渠棘球絳蟲的方法，為如下B1）或B2）或B3）：

B1）以待測樣品的基因組DNA為模板，采用權利要求1-3任一所述的成套試劑進行RPA擴增，根據RPA擴增結果判斷待測樣品是否感染石渠棘球絳蟲：

若在RPA擴增的10min內擴增曲線的熒光信號值超過閾值且出現拐點，則待測樣品感染石渠棘球絳蟲；

若在RPA擴增的10min內擴增曲線的熒光信號值未超過閾值或未出現拐點，則待測樣品未感染石渠棘球絳蟲；

B2）以待測樣品的基因組DNA為模板，采用權利要求1中所述的引物對進行PCR擴增，根據PCR擴增結果判斷待測樣品是否感染石渠棘球絳蟲：

若PCR擴增得到大小為317bp的條帶，則待測樣品感染石渠棘球絳蟲；

若PCR擴增未得到大小為317bp的條帶，則待測樣品未感染石渠棘球絳蟲；

B3）檢測待測樣品的基因組DNA是否含有權利要求1中所述的特異DNA片段：

若待測樣品的基因組DNA含有權利要求1中所述的特異DNA片段，則待測樣品感染石渠棘球絳蟲；

若待測樣品的基因組DNA不含有權利要求1中所述的特異DNA片段，則待測樣品未感染石渠棘球絳蟲；

所述方法為非疾病診斷和治療目的。

7.一種檢測或輔助檢測待測病原體是否為石渠棘球絳蟲的方法，為如下C1）或C2）或C3）：

C1）以待測病原體的基因組DNA為模板，采用權利要求1-3任一所述的成套試劑進行RPA擴增，根據RPA擴增結果判斷待測病原體是否為石渠棘球絳蟲：

若在RPA擴增的10min內擴增曲線的熒光信號值超過閾值且出現拐點，則待測病原體為石渠棘球絳蟲；

若在RPA擴增的10min內擴增曲線的熒光信號值未超過閾值或未出現拐點，則待測病原體不為石渠棘球絳蟲；

C2）以待測病原體的基因組為模板，采用權利要求1中所述的引物對進行PCR擴增，根據PCR擴增結果判斷待測病原體是否感染石渠棘球絳蟲：

若PCR擴增得到大小為317bp的條帶，則待測病原體為石渠棘球絳蟲；

若PCR擴增未得到大小為317bp的條帶，則待測病原體不為石渠棘球絳蟲；

C3）檢測待測病原體的基因組DNA是否含有權利要求1中所述的特異DNA片段：

若待測病原體的基因組DNA含有權利要求1中所述的特異DNA片段，則待測病原體為石渠棘球絳蟲；

若待測病原體的基因組DNA不含有權利要求1中所述的特異DNA片段，則待測病原體不為石渠棘球絳蟲；

所述方法為非疾病診斷和治療目的。

8.根據權利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述大小為317bp的DNA片段的核苷酸序列如SEQ ID No.1第44-360位所示。