[發明專利]一種轉移因子口服液中核苷酸類物質的定量檢測方法

在審

• 申請號: 201810515710.6
• 申請日: 2018-05-25
• 公開（公告）號: CN108931592A
• 公開（公告）日: 2018-12-04
• 發明（設計）人: 李小鳳;蔡慧俠;郭維真;楊靜;劉福敏
• 申請（專利權）人: 金花企業(集團)股份有限公司西安金花制藥廠
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 徐文權

本發明公開了一種轉移因子口服液中核苷酸類物質的定量檢測方法，屬于多組分生化藥物質量研究領域。方法包括：1)利用核苷酸類物質對照品，用高效液相色譜法檢測獲得色譜圖，構建標準曲線方程；2)將待檢測的轉移因子口服液制成供試品溶液，從色譜圖中提取各核苷酸對應的色譜峰面積；3)根據步驟1)獲得的標準曲線方程和步驟2)獲得的色譜峰的面積，計算轉移因子口服溶液中核苷酸類物質的含量。采用本發明的方法能夠有效解決現有技術中僅能籠統的測定一類物質，且檢測干擾物質多，檢測結果重現性差的技術難題。經系統的驗證研究該檢測方法無其他物質干擾、專屬性強、準確可靠，能有效地對轉移因子口服溶液中游離核苷酸檢測與監控。

技術領域

本發明屬于多組分生化藥質量分析研究技術領域，具體涉及一種轉移因子口服液中核苷酸類物質的定量檢測方法。

背景技術

轉移因子(transter factor，簡稱TF)又稱傳輸因子，由具有細胞性免疫功能的淋巴細胞產生，作為一種特定的細胞因子參與機體的免疫反應，能提高動物機體細胞免疫功能。轉移因子口服溶液是以口服為給藥形式的免疫增強劑。轉移因子屬于多肽類物質，是由多核苷酸、多肽及其他成分組成的復合分子。其中小分子肽類物質及核苷酸類物質是轉移因子的功能標示物，并作為其主要功效成分。因此，準確測定轉移因子中的核苷酸含量對于優化轉移因子生產工藝及控制產品質量具有重要的意義。

迄今為止，關于轉移因子中核苷酸含量測定方法的相關報道，均是采用地衣酚法顯色反應，以D-核糖為對照品檢測。該方法的原理為地衣酚試劑與核苷酸降解產生的核糖反應生成糠醛顯色，由D-核糖回歸曲線計算核糖含量，但戊糖均有此反應，專屬性不強；此外該法是根據與RNA中嘌呤堿基結合的核糖部分的顯色反應，僅可檢測核糖核酸(RNA)含量，不可檢測脫氧核糖核酸(DNA)含量。由于轉移因子溶液的提取方法，并非專一針對核糖核苷酸類物質，在提取過程中可能也存在大量脫氧核糖核苷酸類物質，但上述方法并未對此類物質進行測定和控制。

因此，可以看出，現有技術僅能籠統的測定一類物質，且檢測干擾物質多，檢測結果重現性差。

發明內容

為了克服上述現有技術存在的缺陷，本發明的目的在于提供一種轉移因子口服液中核苷酸類物質的定量檢測方法，該方法具有準確性高、重現性好、操作簡便的優勢。

本發明是通過以下技術方案來實現：

本發明公開的轉移因子口服液中核苷酸類物質的定量檢測方法，包括以下步驟：

1)構建核苷酸類物質的標準曲線方程

精密量取各對照品核苷酸類物質制成貯備液，然后將貯備液制成構建標準曲線所需的對照品系列溶液；利用高效液相色譜法檢測獲得色譜圖，以核苷酸類物質中各核苷酸濃度對色譜圖中各核苷酸峰面積，按照最小二乘法進行線性回歸，求出標準曲線方程；其中，色譜檢測條件為：

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑色譜柱；

以流動相A和流動相B進行梯度洗脫，其中：流動相A為甲醇；流動相B為pH值為3.5～3.6的磷酸鹽緩沖溶液；

檢測過程中：波長為210～320nm，進樣量為1～50μL，流速為0.6～1.0mL/min，柱溫為33～37℃；

2)轉移因子口服液中核苷酸類物質的檢測

精密量取待檢測的轉移因子口服液制成供試品溶液，利用高效液相色譜法在與步驟1)相同的色譜檢測條件下獲得色譜圖，提取轉移因子口服液中核苷酸類物質中各核苷酸對應的色譜峰面積；

3)轉移因子口服液中核苷酸類物質的含量計算

根據步驟1)獲得的標準曲線方程和步驟2)獲得的色譜峰的面積，計算得到轉移因子口服溶液中核苷酸類物質的含量。