[發(fā)明專利]一種轉移因子口服液中核苷酸類物質的定量檢測方法

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• 申請日: 2018-05-25
• 公開（公告）號: CN108931592A
• 公開（公告）日: 2018-12-04
• 發(fā)明（設計）人: 李小鳳;蔡慧俠;郭維真;楊靜;劉福敏
• 申請（專利權）人: 金花企業(yè)(集團)股份有限公司西安金花制藥廠
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 徐文權

1.一種轉移因子口服液中核苷酸類物質的定量檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)構建核苷酸類物質的標準曲線方程

精密量取各對照品核苷酸類物質制成貯備液，然后將貯備液制成構建標準曲線所需的對照品系列溶液；利用高效液相色譜法檢測獲得色譜圖，以核苷酸類物質中各核苷酸濃度對色譜圖中各核苷酸峰面積，按照最小二乘法進行線性回歸，求出標準曲線方程及線性相關系數(shù)；其中，色譜檢測條件為：

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑色譜柱；

以流動相A和流動相B進行梯度洗脫，其中：流動相A為甲醇；流動相B為pH值為3.5～3.6的磷酸鹽緩沖溶液；

檢測過程中：波長為210～320nm，進樣量為1～50μL，流速為0.6～1.0mL/min，柱溫為33～37℃；

2)轉移因子口服液中核苷酸類物質的檢測

精密量取待檢測的轉移因子口服液制成供試品溶液，利用高效液相色譜法在與步驟1)相同的色譜檢測條件下獲得色譜圖，提取轉移因子口服液中核苷酸類物質中各核苷酸對應的色譜峰面積；

3)轉移因子口服液中核苷酸類物質的含量計算

根據(jù)步驟1)獲得的標準曲線方程和步驟2)獲得的色譜峰的面積，計算得到轉移因子口服溶液中核苷酸類物質的含量。

2.根據(jù)權利要求1所述的轉移因子口服液中核苷酸類物質的定量檢測方法，其特征在于，所述核苷酸類物質為腺嘌呤核苷酸、胞嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸、鳥嘌呤核苷酸、腺嘌呤脫氧核苷酸、胞嘧啶脫氧核苷酸、胸腺嘧啶脫氧核苷酸、鳥嘌呤脫氧核苷酸、腺嘌呤核苷、胞嘧啶核苷、尿嘧啶核苷和鳥嘌呤核苷。

3.根據(jù)權利要求1所述的轉移因子口服液中核苷酸類物質的定量檢測方法，其特征在于，梯度洗脫時，流動相A與流動相B的變化比例如下：

0min，流動相A：3％、流動相B：97％；

10min，流動相A：3％、流動相B：97％；

10.1min，流動相A：10％、流動相B：90％；

20min，流動相A：10％、流動相B：90％；

20.1min，流動相A：3％、流動相B：97％；

30min，流動相A：3％、流動相B：97％。

4.根據(jù)權利要求1所述的轉移因子口服液中核苷酸類物質的定量檢測方法，其特征在于，所述磷酸鹽緩沖溶液為磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉的混合溶液，該混合溶液中磷酸氫二鈉濃度為0.05mol/L，磷酸二氫鈉溶液的濃度為0.05mol/L。

5.根據(jù)權利要求1所述的轉移因子口服液中核苷酸類物質的定量檢測方法，其特征在于，步驟1)中，精密量取各對照品核苷酸類物質20.0mg，置于100mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液；然后，分別精密量取對照品貯備液0.1mL、0.5mL、1mL、2.5mL及5mL，分別置于25mL量瓶中，加水稀釋至刻度、搖勻，制得對照品系列溶液。

6.根據(jù)權利要求1所述的轉移因子口服液中核苷酸類物質的定量檢測方法，其特征在于，步驟2)中，精密量取待檢測的轉移因子口服溶液5mL，置于10mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻制成供試品溶液。

7.根據(jù)權利要求1所述的轉移因子口服液中核苷酸類物質的定量檢測方法，其特征在于，十八烷基鍵合硅膠色譜柱的填料粒度為5～10μm，內徑為2～5mm，長度為10～30cm。

8.根據(jù)權利要求1所述的轉移因子口服液中核苷酸類物質的定量檢測方法，其特征在于，流動相B的pH值為3.55；檢測波長為260nm；進樣量為2μL，流速為0.8mL/min，柱溫為35℃。