[發明專利]一種產生NO的pH敏感脂質體及其制備方法

有效

• 申請號: 201810515180.5
• 申請日: 2018-05-25
• 公開（公告）號: CN109498818B
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 陳名懋;宋飛飛;張其清;田佳;王建華
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: A61K47/69
• 分類號: A61K47/69;A61K47/59;A61K45/06;A61P35/00;A61K31/337;A61K31/4745;A61K31/475
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發明公開了一種產生NO的pH敏感脂質體及其制備方法，其是通過靜電作用將pH敏感性聚合物PEG?PLL?DMA包覆在脂質體表面，并于脂質體內水相負載親水性NO供體，由磷脂雙分子層包載疏水性抗腫瘤藥物，以構建具有腫瘤組織微環境pH敏感性以及可在腫瘤細胞內產生NO的脂質體。

技術領域

本發明屬于生物醫用材料技術領域，具體涉及一種產生NO的pH敏感脂質體及其制備方法。

背景技術

腫瘤細胞多藥耐藥性的產生是腫瘤治療失敗的重要原因。關于腫瘤細胞的耐藥機制，目前比較流行的觀點是P-糖蛋白（P-gp）介導的藥物外排。NO是一種氣體分子信使，其在各種生理過程中起著關鍵作用。更重要的是，NO可以下調P-gp的表達水平，從而起到逆轉腫瘤多藥耐藥性的作用。據報道，NO供體在腫瘤細胞內可通過酶、酸性、氧化還原、光等刺激產生NO，但是NO供體存在生理穩定性差、缺乏靶向性和組織特異性、藥物作用時間過短等問題，從而限制了其作為P-gp抑制劑的應用。

脂質體是一種由磷脂組成的雙分子層結構囊泡，其具有良好的生物相容性和生物利用度，可以同時包載脂溶性和水溶性的藥物小分子。pH敏感性脂質體可在腫瘤組織或腫瘤細胞的酸性pH條件下促發藥物釋放。本發明結合具有腫瘤微環境（pH=6.5）pH敏感的聚合物PEG-PLL-DMA和NO供體可自發產生NO的特點，構建可產生NO的pH敏感脂質體，使其具有在腫瘤組織微環境中可發生電荷翻轉并自發產生NO的特性，提高療效。

發明內容

本發明的目的在于提供一種產生NO的pH敏感脂質體，該脂質體在腫瘤組織微環境可發生電荷翻轉以促進腫瘤細胞對脂質體的攝取，并可同時產生NO，以抑制P-gp介導的藥物外排，逆轉腫瘤多藥耐藥性。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種產生NO的pH敏感脂質體，該脂質體的磷脂層中包含了膽固醇（Chol）、氫化大豆卵磷脂（HSPC）、1,2-二硬脂酸-3-磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000（DSPE-PEG₂₀₀₀）、(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺（DOTAP）和疏水性抗腫瘤藥物，內水相中包載了親水性NO供體，并通過靜電作用將pH敏感性聚合物聚乙二醇-聚賴氨酸-二甲基馬來酸酐（PEG-PLL-DMA）包覆在脂質體表面。

其中，HSPC、Chol、DSPE-PEG₂₀₀₀、DOTAP和疏水性抗腫瘤藥物的摩爾比為12:1:1:(0.3~10):(0.1~5)。所述疏水性抗腫瘤藥物為紫杉醇、多烯紫杉醇、喜樹堿和長春新堿中的任意一種。

HSPC、DOTAP及DSPE-PEG₂₀₀₀的質量之和與所用親水性NO供體的質量之比為10:1~120:1。所述親水性NO供體為二亞乙基三胺NO親核復合體（DETA NONOate）、聚壬二酐NO親核試劑（PAPA NONOate）和精胺氮氧化加合物（Spermine NONOate）中的任意一種。

HSPC、DOTAP及DSPE-PEG₂₀₀₀的質量之和與所用PEG-PLL-DMA的質量之比為1:1~1:30。

所述產生NO的pH敏感脂質體的制備方法包括以下步驟：

（1）將HSPC、Chol、DSPE-PEG₂₀₀₀、DOTAP和疏水性抗腫瘤藥物溶解于氯仿溶液中；

（2）通過旋轉蒸發法除去氯仿溶液，得到均勻的膜狀材料；

（3）用pH=8.0含0.5~3 mM親水性NO供體的PBS緩沖溶液洗脫后，再采用超聲波細胞破碎儀，在功率為100~400 W的條件下超聲處理5-20 min，以形成包載有NO供體和抗腫瘤藥物的脂質體；

（4）加入PEG-PLL-DMA，室溫攪拌5 min~8 h，即得所述產生NO的pH敏感脂質體。