[發明專利]快速檢測骨關節感染常見細菌的PCR檢測試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201810514985.8
• 申請日: 2018-05-25
• 公開（公告）號: CN108411016A
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發明（設計）人: 干馳;胡金鳳;莫茜;曹清;王志剛;李玉蟬;蔡海清;徐蘊嵐;陶悅;趙瑞珂;杜白露;沈楠
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬上海兒童醫學中心
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/14;C12Q1/04
• 代理公司: 上海韌辰專利代理有限公司 31331
• 代理人: 劉秋蘭

本發明公開了一種快速檢測骨關節感染常見細菌的PCR檢測試劑盒及方法，所述試劑盒包括：引物組，所述引物組包括：金黃色葡萄球菌或耐甲氧西林金黃色葡萄球菌nuc基因引物、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌mecA基因引物、化膿鏈球菌spyM基因引物和銅綠假單胞菌oprI基因引物。由于本發明的檢測骨關節感染常見細菌的試劑盒及方法中引物組的設計可以顯著降低兒童骨關節常見細菌感染的檢測耗時。

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，具體涉及一種快速檢測兒童骨關節感染常見細菌的多重PCR檢測試劑盒及方法。

背景技術

兒童軟組織、骨關節的感染相對其他部位來說是較少發生的。然而由于兒童免疫系統發育不成熟、免疫功能尚不完善，兒童軟組織、骨關節一旦發生感染，輕則延長療程、增加患兒痛苦，重則引起相關急性并發癥。因此對兒童骨科常見細菌的快速、準確檢測和鑒別對兒童骨科感染診斷及治療具有重要意義。兒童骨關節感染的常見細菌有金黃色葡萄球菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、化膿鏈球菌和銅綠假單胞菌等四種。

國內外對細菌性疾病的檢測和診斷技術種類繁多，主要有細菌革蘭氏染色、分離培養及生化鑒定、分子生物學技術以及免疫學技術等。其中，聚合酶鏈式反應(PCR)技術因其簡便、快速、高敏感性和高特異性等特點而被廣泛應用于細菌的快速檢測。然而目前還沒有同時針對金黃色葡萄球菌 (MSSA)、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)、化膿鏈球菌、銅綠假單胞菌四種細菌的快速檢測和鑒別的方法。

發明內容

本發明針對現有技術中兒童骨關節感染常見細菌還沒有快速檢測和鑒別的方法，目的在于提供一種新的檢測骨關節感染常見細菌的試劑盒。

本發明的快速檢測骨關節感染常見細菌的試劑盒包括：

引物組，所述引物組包括：金黃色葡萄球菌或耐甲氧西林金黃色葡萄球菌nuc基因引物、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌mecA基因引物、化膿鏈球菌 spyM基因引物和銅綠假單胞菌oprI基因引物。

所述nuc基因引物包括如SEQ ID NO:1所示的上游引物序列和如SEQ ID NO:2所示的下游引物序列；

所述mecA基因引物包括如SEQ ID NO:3所示的上游引物序列和如SEQ ID NO:4所示的下游引物序列；

所述spyM基因引物包括如SEQ ID NO:5所示的上游引物序列和如SEQ ID NO:6所示的下游引物序列；

所述oprI基因引物包括如SEQ ID NO:7所示的上游引物序列和如SEQ ID NO:8所示的下游引物序列。

引物組明細表

在本發明的PCR檢測試劑盒中，所述nuc基因引物、mecA基因引物、 spyM基因引物和oprI基因引物的上游引物和下游引物的原始濃度分別為 9～11μmol/L優選10μmol/L。

在本發明的PCR檢測試劑盒中，所述多重PCR緩沖液的體積為12.5μL；在所述引物組中，所述nuc基因引物的上游引物和下游引物的體積各為 0.3μL，所述spyM基因引物的上游引物和下游引物的體積各為0.15μL，所述 mecA基因引物的上游引物和下游引物的體積各為0.4μL，所述oprI基因引物的上游引物和下游引物的體積各為0.3μL。

所述PCR檢測試劑盒還包括多重PCR緩沖液和多重PCR DNA聚合酶混合液，所述多重PCR緩沖液的體積為12.5μL(多重PCR緩沖液例如可以是TaKaRa公司的RR062A)

在本發明的PCR檢測試劑盒中，包括無菌水的陰性對照。