[發(fā)明專利]一種蛋白質(zhì)組裝體及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810506122.6
• 申請日: 2018-05-24
• 公開（公告）號: CN108640980B
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 牛忠偉;高偲嘉;田野
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院理化技術(shù)研究所;中國科學(xué)院大學(xué)
• 主分類號: C07K14/08
• 分類號: C07K14/08
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 白鳳瑩

1.一種蛋白質(zhì)組裝體，其特征在于，所述蛋白質(zhì)組裝體是由氟尾修飾的病毒納米粒子衣殼蛋白自組裝而成的具有囊泡結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)組裝體，所述氟尾為含7個氟原子的全氟碳氟鏈，分子式通式為-CH₂(CF₂)₂CF₃；

具體通過包括如下步驟的方法制備：

將病毒納米粒子均勻分散在中性緩沖溶液中，攪拌，形成反應(yīng)溶液一；

向反應(yīng)溶液一中加入1-羥基苯并三唑溶液和氟尾溶液，攪拌，形成反應(yīng)溶液二；

向反應(yīng)溶液二中分次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽溶液，攪拌，形成反應(yīng)溶液三；

反應(yīng)溶液三進(jìn)行透析，得到表面修飾氟尾的病毒納米粒子；

將表面修飾氟尾的病毒納米粒子加入乙酸溶液中，靜置后離心，取上清液；

上清液進(jìn)行脫鹽，對脫鹽后的溶液進(jìn)行檢測并收集含有蛋白的部分；

含有蛋白的部分進(jìn)行透析，等電點沉淀后離心，取沉淀；

沉淀用KOH溶液復(fù)溶后透析，得到修飾氟尾的病毒衣殼蛋白；

將修飾氟尾的病毒衣殼蛋白進(jìn)行透析，即得蛋白質(zhì)組裝體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)組裝體，其特征在于，所述病毒納米粒子衣殼蛋白選自煙草花葉病毒衣殼蛋白、豇豆花葉病毒衣殼蛋白、M13噬菌體衣殼蛋白、T2噬菌體衣殼蛋白中任意一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)組裝體，其特征在于，所述蛋白質(zhì)組裝體的尺寸為30-200nm。

4.一種如權(quán)利要求1-3任一所述的蛋白質(zhì)組裝體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

將病毒納米粒子均勻分散在中性緩沖溶液中，攪拌，形成反應(yīng)溶液一；

向反應(yīng)溶液一中加入1-羥基苯并三唑溶液和氟尾溶液，攪拌，形成反應(yīng)溶液二；所述氟尾為含7個氟原子的全氟碳氟鏈，分子式通式為-CH₂(CF₂)₂CF₃；

向反應(yīng)溶液二中分次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽溶液，攪拌，形成反應(yīng)溶液三；

反應(yīng)溶液三進(jìn)行透析，得到表面修飾氟尾的病毒納米粒子；

將表面修飾氟尾的病毒納米粒子加入乙酸溶液中，靜置后離心，取上清液；

上清液進(jìn)行脫鹽，對脫鹽后的溶液進(jìn)行檢測并收集含有蛋白的部分；

含有蛋白的部分進(jìn)行透析，等電點沉淀后離心，取沉淀；

沉淀用KOH溶液復(fù)溶后透析，得到修飾氟尾的病毒衣殼蛋白；

將修飾氟尾的病毒衣殼蛋白進(jìn)行透析，即得蛋白質(zhì)組裝體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述病毒納米粒子的濃度為0.1mg/ml-10mg/ml。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述反應(yīng)溶液一、1-羥基苯并三唑溶液、氟尾溶液中溶質(zhì)的物質(zhì)的量之比為1:10-200:10-250。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述反應(yīng)溶液二與1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽溶液中溶質(zhì)的物質(zhì)的量之比為1:10-200。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述表面修飾氟尾的病毒納米粒子與乙酸溶液的體積比為1:1-3。

9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述KOH溶液的離子強(qiáng)度為10mM-500mM。