[發(fā)明專利]單環(huán)刺螠糖胺聚糖在抗血栓方面的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810505593.5
• 申請日: 2018-05-24
• 公開（公告）號: CN108836978A
• 公開（公告）日: 2018-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 袁春營;張旭;趙紫越;崔青曼
• 申請（專利權(quán)）人: 天津科技大學
• 主分類號: A61K31/726
• 分類號: A61K31/726;A61P7/02;A61P9/10
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司 12107
• 代理人: 楊歡

本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種單環(huán)刺螠糖胺聚糖在抗血栓方面的應(yīng)用。所述的單環(huán)刺螠糖胺聚糖的制備包括下述步驟：(1)原料處理：將原料單環(huán)刺螠制成勻漿液；(2)酶解；(3)超濾；(4)糖胺聚糖的制備：①除蛋白質(zhì)；②醇沉、洗滌；③陰離子交換柱層析；④凝膠過濾層析得高純糖胺聚糖。本方法反應(yīng)條件溫和、糖胺聚糖得率及純度高，抗血栓作用效果好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種單環(huán)刺螠糖胺聚糖在抗血栓方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)

血栓性疾病嚴重威脅人類的生命健康，其發(fā)病率高居各種疾病之首，其病因及發(fā)病機制十分復(fù)雜，迄今尚未完全闡明，目前認為血小板功能異常和血管內(nèi)皮細胞損傷是血栓形成的重要因素。血栓形成是心腦缺血性疾病的主要致病因素之一，研究表明，腦缺血時，血小板功能異?？哼M，血液處于高凝狀態(tài)，是造成繼發(fā)性腦損傷的重要原因之一，可見，血小板的活化和聚集在血栓形成中發(fā)揮著重要作用。

單環(huán)刺螠，俗名海腸、海腸子，屬于螠蟲動物門、螠綱、無管螠目、刺螠科、刺螠屬。分布于俄羅斯、日本、朝鮮和我國渤海灣等，是中國北方沿海泥沙岸潮間帶下區(qū)及潮下帶淺水區(qū)底棲生物的常見種。研究發(fā)現(xiàn)該糖胺聚糖具有很強的抗凝血和抗血小板聚集作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種單環(huán)刺螠糖胺聚糖在抗血栓方面的應(yīng)用。

本發(fā)明為實現(xiàn)上述目的，采用以下技術(shù)方案：

一種單環(huán)刺螠糖胺聚糖在抗血栓方面的應(yīng)用，所述的單環(huán)刺螠糖胺聚糖采用下述方式制備：

(1)原料處理：將原料單環(huán)刺螠洗凈后，勻漿，制成勻漿液；

(2)酶解：向所述勻漿液中加入枯草桿菌中性蛋白酶，在43℃-47℃水浴條件下酶解4-6h，酶解液煮沸滅酶后，5000r-8000r/min離心10min-15min，得上清液；

(3)超濾：將所述上清液通過相對分子質(zhì)量1萬的中空纖維濾膜超濾分離，得到相對分子質(zhì)量1萬以下和相對分子質(zhì)量1萬以上的兩種組分的液體；

(4)糖胺聚糖的制備：

①除蛋白質(zhì)：將所述相對分子質(zhì)量1萬以上的組分的液體濃縮至該液體體積的1/3-1/4，先用HCl水溶液調(diào)pH至2.0，離心除去沉淀，上清液用NaOH 水溶液調(diào)pH至7.0，離心除去沉淀，上清液加入三氯乙酸使三氯乙酸的最終質(zhì)量濃度為3％-5％，離心除去蛋白質(zhì)沉淀；

②醇沉、洗滌：將步驟①獲得的上清液在攪拌下加入乙醇，使乙醇的體積濃度為70％-80％，于4℃條件下靜置20-28小時，5000r-8000r/min離心10min -15min，移去上清液，沉淀依次用丙酮和無水乙醇洗滌2-4次，得粗提糖胺聚糖；

③陰離子交換柱層析：將粗提糖胺聚糖溶于蒸餾水中，使其質(zhì)量濃度為1％ -3％，加到陰離子交換柱中，先用pH＝5.0-5.5乙酸-乙酸鈉緩沖溶液洗脫，再用0-2mol/L梯度的NaCl水溶液洗脫，洗脫液濃縮至洗脫液體積的1/2-1/4、透析、再濃縮至透析后液體積的1/3-1/4；

④凝膠過濾層析：將步驟③獲得的濃縮液上樣于SephadexG-100凝膠過濾柱，進一步分離純化，收集的流出液濃縮至流出液體積的1/4-1/6，濃縮液冷凍干燥得高純糖胺聚糖。

該高純糖胺聚糖用于抗血栓藥物或保健品的使用劑量為200μg-500μ g/kg/d。

所述的單環(huán)刺螠糖胺聚糖可以應(yīng)用于口服、注射或者外用劑。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

1.本方法反應(yīng)條件溫和、糖胺聚糖得率及純度高，抗血栓作用效果好。