[發明專利]一種脫氧雪腐鐮刀菌烯醇定量快速檢測卡及其檢測方法

在審

• 申請號: 201810505233.5
• 申請日: 2018-05-24
• 公開（公告）號: CN108761075A
• 公開（公告）日: 2018-11-06
• 發明（設計）人: 劉建龍;吳文娟;王俞丹
• 申請（專利權）人: 河北伊萊莎生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 陸惠中;王永偉

1.一種脫氧雪腐鐮刀菌烯醇定量快速檢測卡，其特征在于：包括依次設置于底板上的樣品墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述硝酸纖維素膜上具有包被有脫氧雪腐鐮刀菌烯醇半抗原-載體蛋白偶聯劑的檢測線和包被有羊抗鼠抗體的質控線，待檢樣本溶液在滴加到所述樣品墊之前與偶聯有DON抗體的乳膠微球進行混合、孵育處理。

2.根據權利要求1所述的檢測卡，其特征在于：所述檢測線和所述質控線的包被量分別為0.1mg/mL和0.4mg/mL。

3.根據權利要求1所述的檢測卡，其特征在于：所述樣品墊、所述硝酸纖維素膜和所述吸水墊依次粘貼固定在所述底板上，所述樣品墊和所述吸水墊分別與所述硝酸纖維素膜搭接。

4.根據權利要求1所述的檢測卡，其特征在于：所述脫氧雪腐鐮刀菌烯醇半抗原-載體蛋白偶聯劑的通過下述方法制備獲得：先將脫氧雪腐鐮刀菌烯醇半抗原溶解于DMF中，再加入EDC，然后將制得的溶液在室溫下攪拌24小時后，逐滴緩慢滴加到溶解有OVA的CB溶液中，并于室溫下攪拌24小時，最后將得到的溶液用PBS透析3天。

5.根據權利要求4所述的檢測卡，其特征在于：所述脫氧雪腐鐮刀菌烯醇半抗原-載體蛋白偶聯劑通過下述方法制備獲得：先取8mg脫氧雪腐鐮刀菌烯醇半抗原溶解于0.8mL的DMF中，再將加入用0.2mL的水充分溶解的20mg的EDC后，在室溫下攪拌24小時，即可得到反應液A，稱取36mg的OVA并充分溶解在3mL濃度為0.1mol/L、pH為9.6的CB中，即可得到蛋白溶液A，將反應液A逐滴緩慢滴加到蛋白溶液A中，并于室溫下攪拌24小時，最后，用濃度為0.01mol/L的PBS在4℃條件下透析3天并且每天更換3次透析液，即得到所述脫氧雪腐鐮刀菌烯醇半抗原-載體蛋白偶聯劑。

6.根據權利要求1所述的檢測卡，其特征在于：所述偶聯有DON抗體的乳膠微球通過下述方法制備獲得：

S1：在乳膠微球中加入25mM、pH6.0的MES緩沖溶液，混勻后利用MES緩沖溶液進行離心洗滌；

S2：以1L微球對應40μL的NHS和40μL的EDC的比例分別加入25mM的NHS和EDC反應液，混勻后進行孵育10min處理；

S3：利用MES緩沖溶液進行離心洗滌、去上清液處理；

S4：加入DON抗體至其終濃度為0.6mg/mL后混勻，反應2h；

S5：進行離心去除上清處理，并加入2％的BSA進行封閉,再次混勻，在反應1h后進行離心去除上清處理，之后，加入2％的BSA進行清洗、混勻；

S6：進行離心去除上清處理，微球懸浮于儲存10mMpH7.0PBS緩沖溶液中，混勻并保存于儲存溫度為2-8℃的冰箱中備用，即得到偶聯抗體；

S7：取上述制得的偶聯抗體用凍干稀釋液稀釋后，進行凍干處理，將偶聯抗體凍干于乳膠微球的微孔中形成反應微孔，即完成所述偶聯抗體的凍干與包被，得到偶聯有DON抗體的乳膠微球。

7.根據權利要求6所述的檢測卡，其特征在于：所述25mM、pH6.0的MES緩沖溶液的的制備方法為：將0.53g的MES溶于90mL純水中，調節pH為6.0，并用純水定容于100mL。