[發明專利]一種脫氧雪腐鐮刀菌烯醇定量快速檢測卡及其檢測方法

在審

• 申請號: 201810505233.5
• 申請日: 2018-05-24
• 公開（公告）號: CN108761075A
• 公開（公告）日: 2018-11-06
• 發明（設計）人: 劉建龍;吳文娟;王俞丹
• 申請（專利權）人: 河北伊萊莎生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 陸惠中;王永偉

本發明公開了一種脫氧雪腐鐮刀菌烯醇定量快速檢測卡，包括依次設置于底板上的樣品墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述硝酸纖維素膜上具有包被有DON半抗原?載體蛋白偶聯劑的檢測線和包被有羊抗鼠抗體的質控線，待檢樣本溶液在滴加到所述樣品墊前與偶聯有DON抗體的乳膠微球進行混合、孵育處理；其檢測方法包括預熱、加液、孵育、反應和讀取結果；本發明所述檢測卡無需含金標抗體的釋放墊，用于與檢測樣本溶液混合的偶聯有DON抗體的乳膠微球，顏色鮮艷易判別，且偶聯抗體為化學鍵偶合，比膠體金物理吸附穩定性好，檢測準確度和精密度高；批次間差異性小成本低；另外，本發明所述檢測卡的檢測方法操作簡易，適于批量化生產和應用。

技術領域

本發明是涉及一種定量快速檢測卡及其檢測方法，具體說，是涉及一種脫氧雪腐鐮刀 菌烯醇定量快速檢測卡及其檢測方法，屬于生物檢測技術領域，特別適用于糧油和谷物類 的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的定量快速檢測。

背景技術

嘔吐毒素(vomitoxin)，又稱脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)，化學名為3 α,7α,15一三羥基草鐮孢菌-9-烯-8-酮，屬單端孢霉烯族化合物。由于它可以引起豬的嘔吐而得名，對人體也有一定危害作用，歐盟分類標準為三級致癌物。嘔吐毒素對人和動物均有很強的毒性，能引起人和動物嘔吐、腹瀉、皮膚刺激、拒食、神經紊亂、流產、死 胎等，豬是對嘔吐毒素最敏感的動物，家禽次之，反芻動物由于瘤胃微生物的作用，耐受 力最強。嘔吐毒素屬于霉菌毒素的一種，目前糧油和谷物領域流行的霉菌毒素試紙條主要 為膠體金定性產品，膠體金定量產品由于準確度、精密度和穩定性很難達到要求，一直難 以占市場主導，客戶只能靠酶聯免疫試劑盒和儀器法如高效液相等，檢測樣品的具體含量， 酶聯免疫試劑盒和儀器法對人員和環境的要求較高，檢測時間較長。我國國家標準 GB2761-2017食品安全國家標準食品中真菌毒素國家限量嘔吐毒素限量1000μg/kg。

現有脫氧雪腐鐮刀菌烯醇試紙條主要采用膠體金標技術，將特異性的抗原或抗體以條 帶狀固定在膜上，膠體金標記試劑(抗體或單克隆抗體)吸附在結合墊上，當待檢樣本加 到試紙條一端的樣本墊上后，通過毛細作用向前移動，溶解結合墊上的膠體金標記試劑后 相互反應，再移動至固定的抗原或抗體的區域時，待檢物與金標試劑的結合物又與之發生 特異性結合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結果；如李培真等人采用 膠體金測試條法快速定量測定糧食中的嘔吐毒素(膠體金測試條法對糧食中玉米赤霉烯酮 快速定量測定的應用研究，王桂芳、李培真、曹陽、郭健、劉美辰，《糧食科技與經濟》2014 年2月第39卷第1期)，以驗證此方法在檢測糧食中嘔吐毒素的適用性。

然上述方法存在如下問題：

(1)膠體金本身為暗紫紅色，顏色較淺，不易判別檢測結果的陰陽性；

(2)膠體金一批制金量最多約10L左右，粒徑偏差較難精準控制，大量生產定量產品， 不同批容易造成大的批間差，進而影響檢測結果的精度和結果穩定性；

(3)膠體金標記技術為物理吸附，較化學鍵偶聯，產品穩定性較差；

(4)目前市場膠體金試紙條主要為定性產品，不能滿足人們對操作快速、簡單、人員 要求低、成本低、肉眼可視的定量產品的應用需求，且現有定性篩選，假陰性和假陽性較高；

(5)燒金、標記抗體工作量較大，工藝繁瑣，產出少，浪費人力物力。

發明內容

針對現有技術存在的上述問題和需求，本發明的目的是提供一種脫氧雪腐鐮刀菌烯醇 定量快速檢測卡及其檢測方法，將待檢測樣液提前與乳膠微球混合制得含DON抗體的反應 液后再滴加到檢測卡上進行檢測，提高了檢測結果的準確度和穩定性，無需再利用膠體金 將DON抗體標記在檢測卡上，操作和制作簡單，成本低廉，適于大批量產出和應用。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：