[發明專利]一種免疫球蛋白制劑的純化方法

有效

• 申請號: 201810504757.2
• 申請日: 2018-05-24
• 公開（公告）號: CN108467430B
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發明（設計）人: 高建軍;楊俊杰;包正琦;段麗娟;張光磊
• 申請（專利權）人: 蘭州生物制品研究所有限責任公司
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C07K16/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/22
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦

本發明公開一種免疫球蛋白制劑的純化方法，特別是一種破傷風馬免疫球蛋白F(ab’)₂制劑的純化方法。本發明的免疫球蛋白制劑純化方法，是將待處理的蛋白用免疫親和層析進行純化。本發明方法與現有技術相比更具專一性、高效性、特異性，制備得到的破傷風馬免疫球蛋白F(ab’)₂制劑具有高效價、高比活性的特點，且在生產中不依賴于高效價的原料血漿，提高了血漿的利用率，降低了血漿生產企業的成本。

技術領域

本發明涉及一種蛋白制劑的純化方法，確切講本發明涉及一種免疫球蛋白制劑的純化方法，特別是一種破傷風馬免疫球蛋白F(ab’)₂制劑的純化方法。

背景技術

破傷風(Tetanus)是破傷風梭菌經由皮膚或黏膜傷口侵入人體，在缺氧環境下生長繁殖，產生毒素而引起肌痙攣的一種特異性感染。因各種原因造成深部創傷的患者，均給予預防或治療破傷風的藥物，一般為破傷風抗毒素。破傷風抗毒素是由破傷風類毒素免疫馬所得的血漿，經胃酶消化后純化制成的液體抗毒素球蛋白制劑。

破傷風抗毒素的生產具有悠久的歷史，其生產技術也一直發展變化。破傷風抗毒素的制造方法前后經歷過三個發展階段，最初階段的“原制血清”制品質量差，不良反應發生率高。第二個階段制備的“濃制血清”，去除了大部分雜蛋白并使抗毒素蛋白得到了一定的濃縮，質量有較大的改進。第三個階段是精制抗毒素階段，自20世紀30年代創建，引入了胃酶消化，加溫變性工藝，20世紀80年代在此基礎上引入了超濾技術，把胃酶消化、硫酸銨鹽析、超濾技術組成一個新的抗毒素生產工藝，即為現有技術中的硫酸銨沉淀工藝，此工藝使制品的外觀、透明度、純度等均有了較大的提高。(參見《醫學生物制品學》，第二版，人民衛生出版社，1144)

現有技術中的硫酸銨沉淀工藝是生產破傷風抗毒素的通用方法。其原理為高濃度的鹽離子在蛋白質溶液中可與蛋白質競爭水分子，從而破壞蛋白質表面的水化膜，降低其溶解度，使之從溶液中沉淀出來。該工藝屬于粗放提純過程，純化的破傷風抗毒素蛋白含量高、比活性低。

隨著層析技術的發展，在硫酸銨沉淀工藝基礎上增加離子交換層析技術，破傷風抗毒素隨之升級換代為破傷風馬免疫球蛋白F(ab’)₂。離子交換層析是利用蛋白質所帶電荷的不同來分離蛋白質，采用不同的pH和(或)離子強度的緩沖液洗脫，使帶不同電荷的蛋白質分離。增加離子交換層析工藝后，產品比活性得到了一定幅度的提高，但離子交換層析工藝屬于非特異性吸附，不具有專一性，產品的比活性提高幅度有限。關于離子交換層析工藝參見申請號為201610492044.X、名稱為《一種無防腐劑的馬破傷風免疫球蛋白制劑及其制備方法》的中國發明專利申請。

發明內容

本發明提供了一種克服現有技術不足的蛋白制劑的純化方法。

本發明的免疫球蛋白制劑的純化方法是將經胃酶消化、硫酸銨沉淀、超濾處理后的蛋白用免疫親和層析進行純化。

本發明所述的免疫球蛋白制劑的純化方法特別適用于破傷風馬免疫球蛋白F(ab’)₂。

優選地，本發明所涉及的免疫球蛋白是破傷風馬免疫球蛋白F(ab’)₂，其免疫親和層析所用的層析介質為破傷風類毒素與載體偶聯。本發明優先的載體為預活化的瓊脂糖凝膠，特別是NHS-activated Sepharose 4Fast Flow、CNBr-activated Sepharose 4B、Epoxy-activated Sepharose 6B、CNBr-activated Sepharose 4FastFlow、CNBr-activated Sepharose 6MB、CNBr-activated Bestarose 4FastFlow、CNBr-activatedBestarose 4B、NHS-activated Bestarose 4FastFlow或Epoxy-activatedBestarose 6B。