[發明專利]一種免疫球蛋白制劑的純化方法

有效

• 申請號: 201810504757.2
• 申請日: 2018-05-24
• 公開（公告）號: CN108467430B
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發明（設計）人: 高建軍;楊俊杰;包正琦;段麗娟;張光磊
• 申請（專利權）人: 蘭州生物制品研究所有限責任公司
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C07K16/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/22
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦

1.一種免疫球蛋白制劑的純化方法，將待處理的蛋白用層析法處理，其特征在于所述的層析為免疫親和層析，所涉及的免疫球蛋白是馬免疫球蛋白F(ab’)₂，所用的層析介質為破傷風類毒素與載體(Matrix)偶聯；所用的載體為預活化的瓊脂糖凝膠；

所述的方法包括：

先清洗載體去除保護劑，再將載體與配基緩沖體系均置換為pH 8.3的0.1M NaHCO₃含0.5M NaCl溶液，然后將載體與配基混合在室溫下振蕩1～4小時或4℃條件下過夜后裝柱，使用pH 8.3的0.1M NaHCO₃含0.5M NaCl溶液沖洗層析柱去除未結合配基，再分別依次用pH8.0的0.1M Tris-HCl緩沖液、pH 8.0～9.0的0.1M Tris-HCl含0.5M NaCl緩沖液和pH 3.0～4.0的0.1M HAc含0.5M NaCl緩沖液沖洗層析柱，再將破傷風馬免疫血漿經胃酶消化、硫酸銨沉淀、超濾處理后加載到層析柱中，用平衡緩沖液沖洗層析柱至紫外吸收值達到基線，再用洗脫緩沖液洗脫，收集洗脫峰，得到馬破傷風免疫球蛋白F(ab’)₂溶液，用30～50KD的超濾膜超濾置換緩沖體系至超濾濃縮液蛋白含量為10～40g/L，所述平衡緩沖液為20～50mM PB，含0.1～0.5M NaCl，pH 7.0±0.2；所述洗脫緩沖液為0.1～0.5M HAc溶液、0.1～0.5M HAc含0.1～0.5M NaCl溶液、0.05～0.5M Gly-HCl溶液或0.05～0.5M Gly-HCl含0.1～0.5M NaCl溶液中的一種；所述超濾緩沖液為0.4％～0.7％NaCl溶液。

2.根據權利要求1所述的免疫球蛋白制劑的純化方法，其特征在于

將權利要求1得到的洗脫液調整pH至6.0～7.0，再按9.0～11.0g/L加入甘氨酸，用稀釋液稀釋至效價≥2000IU/ml，除菌過濾，分裝，得到一種高效價、高比活性的馬破傷風免疫球蛋白F(ab’)₂制劑，所述稀釋液為0.9％～1.1％甘氨酸溶液，含0.4％～0.7％NaCl。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所用的載體為NHS-activated Sepharose4Fast Flow、CNBr-activated Sepharose 4B、Epoxy-activated Sepharose 6B、CNBr-activated Sepharose 4Fast Flow、CNBr-activated Sepharose 6MB、CNBr-activatedBestarose 4Fast Flow、CNBr-activated Bestarose 4B、NHS-activated Bestarose4Fast Flow或Epoxy-activated Bestarose 6B中的任一種。