[發明專利]一種香樟SSR引物組合及其品種鑒定方法有效
| 申請號： | 201810504433.9 | 申請日： | 2018-05-23 |
| 公開（公告）號： | CN108384885B | 公開（公告）日： | 2019-12-17 |
| 發明（設計）人： | 鐘永達;胥猛;酈芝汀;余發新;徐立安 | 申請（專利權）人： | 江西省科學院生物資源研究所;南京林業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 32274 南京申云知識產權代理事務所(普通合伙) | 代理人： | 邱興天 |
| 地址： | 330000 *** | 國省代碼： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 香樟 分子鑒定 品種鑒定 聚丙烯酰胺凝膠 快速分子檢測 植物新品種 電泳 擴增反應 引物組合 指紋圖譜 一次PCR 構建 應用 成功 | ||
1.一種香樟品種分子鑒定引物組合物，其特征在于，由4對引物組成，其引物序列如下表所示：
。
2.一種應用權利要求1所述的引物組合物快速鑒定香樟品種的方法，其特征在于，包括以下步驟：
1）提取待測樣品DNA；
2）使用相同的反應體系和反應程序，按權利要求1表格中的引物順序依次對待測香樟樣本進行PCR擴增；
3）PCR產物則利用8%聚丙烯酰胺凝膠電泳和銀染法進行檢測，依據擴增產物的有無和大小進行判讀，對照品種指紋代碼，鑒定待測樣品的品種。
3.根據權利要求2所述的應用引物組合物快速鑒定香樟品種的方法，其特征在于，步驟1）中，利用Ezup柱式植物基因組DNA抽提試劑盒完成待測樣品DNA提取。
4.根據權利要求2所述的應用引物組合物快速鑒定香樟品種的方法，其特征在于，步驟2）中，10μL PCR擴增反應體系包括：1μ 10×Buffer；0.75mM MgCl2；0.025mM dNTPs；1U TaqDNA聚合酶；0.4μM SSR引物和30ng DNA模板。
5.根據權利要求2所述的應用引物組合物快速鑒定香樟品種的方法，其特征在于，步驟2）中，PCR反應程序為：預變性94℃5min；30循環的94℃30s，最佳Tm 58℃30s，72℃30s；延伸72℃3min，最終4℃保存。
6.根據權利要求2所述的應用引物組合物快速鑒定香樟品種的方法，其特征在于，步驟3）中，依據待測樣品PCR產物判讀情況，對照品種指紋代碼，鑒定待測樣品。
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