[發明專利]一種檢測鑒定昆蟲體內Wolbachia感染的特異性引物、方法和試劑盒

有效

• 申請號: 201810504166.5
• 申請日: 2018-05-23
• 公開（公告）號: CN108707681B
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 何曉芳;林良冠;張美嬌
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

1.特異性擴增引物Tw16s1在檢測昆蟲體內Wolbachia感染或在制備昆蟲體內Wolbachia感染檢測試劑或試劑盒中的應用，其特征在于，所述引物Tw16s1包括正向引物Tw16s1-F和反向引物Tw16s1-R，其序列依次如SEQ ID NO：1～2所示；所述昆蟲選自短管赤眼蜂(Trcichogramma pretiosum)、內華達赤眼蜂(Trichogramma nerudai)、微小赤眼蜂(Trichogramma minutum)、卷蛾赤眼蜂(Trichogramma cacoeciae)、食胚赤眼蜂(Trichogramma embryophagum)、甘藍夜蛾赤眼蜂(Trichogramma brassicae)、螟黃赤眼蜂(Trichogramma chilonis)、廣赤眼蜂(Trichogramma evanesscens)、玉米螟赤眼蜂(Trichogramma ostriniae)、土耳其斯坦赤眼蜂(Trichogramma tukestanica)或米蛾卵(Corcyra cephalonica)；所述應用不以疾病的診斷或治療為目的。

2.一種不以疾病的診斷或治療為目的的檢測鑒定昆蟲體內Wolbachia感染的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.提取待測昆蟲總DNA；所述昆蟲選自短管赤眼蜂(Trcichogramma pretiosum)、內華達赤眼蜂(Trichogramma nerudai)、微小赤眼蜂(Trichogramma minutum)、卷蛾赤眼蜂(Trichogramma cacoeciae)、食胚赤眼蜂(Trichogramma embryophagum)、甘藍夜蛾赤眼蜂(Trichogramma brassicae)、螟黃赤眼蜂(Trichogramma chilonis)、廣赤眼蜂(Trichogramma evanesscens)、玉米螟赤眼蜂(Trichogramma ostriniae)、土耳其斯坦赤眼蜂(Trichogramma tukestanica)或米蛾卵(Corcyra cephalonica)；

S2.以S1的DNA為模板，利用權利要求1所述正向引物Tw16s1-F和反向引物Tw16s1-R作為PCR引物進行PCR擴增反應；

S3.將S2的PCR擴增反應產物電泳檢測，若擴增反應產物為612bp的單一條帶，則表明待測昆蟲中含有Wolbachia。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，S2所述PCR擴增反應的體系為25μL：DNA模板1μL，10μM Tw16s1-F 1μL，10μM Tw16s1-R 1μL，2×TSINGKE Master Mix 12.5μL，5x GCbuffer 5μL，滅菌水4.5μL。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，S2所述PCR擴增條件為98℃預變性3min；98℃變性10s，65℃退火10s，72℃延伸25s，40個循環；72℃延伸2min。