[發明專利]一種利用高效液相色譜儀測定柚子中吡唑醚菌酯殘留量的方法

在審

• 申請號: 201810503468.0
• 申請日: 2018-05-23
• 公開（公告）號: CN108593801A
• 公開（公告）日: 2018-09-28
• 發明（設計）人: 楊麗華;熊峰;龔道新;羅海峰;肖燦嶺;曾新顏
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 何為;李宇

1.一種利用高效液相色譜儀測定柚子中吡唑醚菌酯殘留量的方法,其特征在于包括：

步驟一：根據吡唑醚菌酯的性質選定高效液相色譜儀檢測條件為：檢測器采用紫外檢測器；色譜柱長度為250mm×4.6mm，粒徑為5u的Agilent Zorbax-C₁₈色譜柱,柱溫為30℃，流速為0.6mL/min，進樣量為20uL，流動相為乙腈和水，乙腈和水溶液的體積比為70：30，波長為278nm,保留時間12.6min；

步驟二：標準溶液的配制

準確稱取質量濃度為97.0％的吡唑醚菌酯標準品，用色譜乙腈溶解并配制成吡唑醚菌酯質量濃度為1000.0mg/L的標準母液，并采用梯度稀釋法用色譜乙腈稀釋配制成0.01、0.05、0.10、0.50、1.00、2.00及5.00mg/L的標準工作溶液，在選定的高效液相色譜儀檢測條件下進行測定，以吡唑醚菌酯的質量濃度C為橫坐標、相應的色譜峰面積A1為縱坐標繪制標準工作曲線，得出吡唑醚菌酯線性方程為：A1＝120.62C+0.3032，線性方程的相關系數R²≥0.9999，由此確定，步驟一選定的高效液相色譜儀檢測條件能進行柚子樣品的定性和定量分析；

步驟三：樣品前處理

將待測的柚子皮、柚子肉和柚子全果樣品分別進行切碎，然后勻漿，分別得到柚子皮、柚子肉和柚子全果樣品；

步驟四：吡唑醚菌酯的提取

分別準確稱取已制備好的柚子全果、柚子肉和柚子皮樣品20.0g，置于具塞瓶中，加入80mL乙腈，在35℃下振蕩提取0.5-1h，之后經布氏漏斗減壓抽濾，收集全部濾液轉移到已加入5gNaCl的具塞筒中，搖勻，取40mL上清液，在旋轉蒸發儀上于45℃濃縮至近干，形成提取濃縮液，其中柚子全果和柚子皮樣品提取濃縮液待弗羅里硅土層析柱凈化，柚子肉提取濃縮液用色譜乙腈定容至5.0mL，過0.45μm有機系濾膜，得到柚子肉樣品待測溶液，待HPLC檢測；

步驟五：柚子全果和柚子皮樣品提取濃縮液的凈化

將弗羅里硅土層析柱從下至上依次裝填脫脂棉、2cm厚無水硫酸鈉、5g弗羅里硅土、2cm厚無水硫酸鈉，在裝柱的過程中要敲緊敲實，在弗羅里硅土凈化層析柱裝好后，先用10mL體積比為1:9的丙酮和正己烷混合液預淋洗，再將步驟四得到的柚子全果或柚子皮的提取濃縮液全部移入弗羅里硅土層析凈化柱中，用50mL體積比為1:9的丙酮和正己烷混合液進行少量多次淋洗，收集全部淋出液轉入旋轉蒸發儀上于40℃濃縮近干，再用色譜乙腈定容至5.0mL，過0.45μm有機系濾膜，得到柚子全果或柚子皮樣品待測溶液，待HPLC檢測；

步驟六：殘留量測定結果的計算

運用步驟一中選定的高效液相色譜儀檢測條件對步驟四得到的柚子肉樣品待測溶液和步驟五得到的柚子全果或柚子皮樣品待測溶液mg，V mL進行HPLC測定，測得柚子全果、柚子肉或柚子皮樣品待測溶液中吡唑醚菌酯的色譜峰面積A₂，代入殘留量計算公式，求得柚子全果、柚子肉或柚子皮樣品待測溶液中吡唑醚菌酯的質量濃度X，即得樣品待測溶液中吡唑醚菌酯的殘留量，其中殘留量計算公式如下：

式中：X－樣品待測溶液中吡唑醚菌酯的殘留量，mg/kg；

C－標準工作溶液中吡唑醚菌酯的濃度，mg/L；

V－樣品最終定容體積，mL；

A₁－標準工作溶液中的吡唑醚菌酯色譜峰面積；

A₂－樣品待測溶液中的吡唑醚菌酯的色譜峰面積；

m－樣品質量，g。

2.根據權利要求1所述的一種利用高效液相色譜儀測定柚子中吡唑醚菌酯殘留量的方法,其特征在于，所述步驟五中用50mL體積比為1:9的丙酮和正己烷混合液淋洗的用量為每次5mL。

3.根據權利要求1所述的一種利用高效液相色譜儀測定柚子中吡唑醚菌酯殘留量的方法，其特征在于還包括測定回收率、相對偏差及檢出限：在步驟三制備得到的柚子全果、柚子肉或柚子皮樣品中添加吡唑醚菌酯的標準工作溶液，使其濃度分別為0.05、0.50和5.00mg/kg，每檔濃度重復5次，后續操作同步驟四和步驟五，得到柚子全果、柚子肉或柚子皮樣品待測溶液，利用步驟一中選定的HPLC檢測條件測定柚子全果、柚子肉或柚子皮樣品待測溶液中吡唑醚菌酯的殘留量，并計算其回收率是否達到70-110％，相對標準偏差是否為0-20％，吡唑醚菌酯的最小檢出量是否為1.0×10^-9g，最小檢出濃度為0.05mg/kg，步驟二中線性方程的相關系數是否大于0.99，若五個指標皆達到標準，說明建立的檢測方法的靈敏度、準確度和精密度都符合農藥殘留檢測的要求。