[發明專利]一種膠體金利用標記羊抗鼠二抗后間接連接鼠抗標記的金標免疫層析試紙條的制備方法

有效

• 申請號: 201810498754.2
• 申請日: 2018-05-23
• 公開（公告）號: CN108872611B
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: 王欽;鄭硯超
• 申請（專利權）人: 浙江安吉賽安芙生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/58;G01N33/558;G01N33/532
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本發明公開了一種膠體金利用標記羊抗鼠二抗后間接連接鼠抗標記的金標免疫層析試紙條的制備方法，包括以下步驟：（1）利用檸檬酸三鈉還原氯金酸制備膠體金溶液；（2）利用膠體金溶液標記羊抗鼠二抗；（3）將需要標記的鼠抗加入到上述標記羊抗鼠二抗的膠體金溶液；（4）將上述間接標記鼠抗的膠體金溶液處理在結合墊上；（5）將對應抗原處理在硝酸纖維素膜上；（6）將硝酸纖維素膜、吸水紙、結合墊、樣品墊貼于PVC塑料底板上；（7）將制備好的金標免疫層析試紙條按照產品質量標準進行質量鑒定。本發明的優點是提高了金標免疫層析試紙條的檢測靈敏度并減少了標記使用的抗體量，在減少成本的同時能提高試紙的性能，且檢測結果穩定可靠。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域的體外診斷試劑技術領域，更具體地說，它涉及一種膠體金利用標記羊抗鼠二抗后間接連接鼠抗標記的金標免疫層析試紙條的制備方法。

背景技術

1971年Faulk和Taytor將膠體金引入免疫化學，此后免疫膠體金技術作為一種新的免疫學方法。膠體金標記，實質上是蛋白質等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。吸附機理可能是膠體金顆粒表面負電荷，與蛋白質的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結合。用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這種球形的粒子對蛋白質有很強的吸附功能，可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價結合，因而在基礎研究和臨床實驗中成為非常有用的工具。

羊抗鼠二抗是由鼠源性抗原注射到羊體內產生的抗體，同時具有能與膠體金結合且能免疫鼠源性抗體的特性。

膠體金免疫層析技術目前已經在體外診斷技術領域廣泛運用，但現在傳統膠體金標記技術多為直接將待標記抗體直接標記在膠體金溶液上，耗費抗體過多且標記方法復雜，從而影響膠體金免疫層析技術的發展及推廣。

發明內容

針對現有技術存在的不足，本發明的目的在于提供一種能解決上述膠體金標記問題的制備方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種膠體金利用標記羊抗鼠二抗后間接連接鼠抗標記的金標免疫層析試紙條的制備方法，包括以下步驟：

（1）利用檸檬酸三鈉還原氯金酸制備膠體金溶液，制備的膠體金粒徑在20nm?30nm范圍內；

（2）利用膠體金溶液標記羊抗鼠二抗，使用0.1M碳酸鉀溶液調整膠體金溶液的PH接近羊抗鼠二抗的等電點，從而使膠體金溶液與羊抗鼠二抗形成牢固結合，由于這種結合是靜電結合，所以不影響抗體的生物特性。除此之外，標記過程中還需注意體系中的離子濃度以及蛋白質純度，并在標記后通過離心濃縮的方式對膠體金溶液進行純化及濃縮；

（3）將需要標記的鼠抗加入到上述標記羊抗鼠二抗的膠體金溶液，由于膠體金溶液上標記了羊抗鼠二抗，所以鼠抗加入后能通過羊抗鼠二抗間接標記在膠體金溶液上；

（4）將上述間接標記鼠抗的膠體金溶液處理在結合墊上，需要注意處理的均一性以及干燥保存條件；

（5）將對應抗原處理在硝酸纖維素膜上，將對應的抗原用1×PBS溶液稀釋到合適濃度后，使用劃膜儀處理在硝酸纖維素膜上；

（6）將硝酸纖維素膜、吸水紙、結合墊、樣品墊貼于PVC塑料底板上，切條并干燥保存。如果是卡殼或筆型試紙，則需要將試紙條放置在卡殼的指定槽內；

（7）將制備好的金標免疫層析試紙條按照產品質量標準進行質量鑒定。

進一步的，所述步驟（1）中使用的還原劑為檸檬酸三鈉。

進一步的，所述步驟（2）中膠體金直接標記的抗體是羊抗鼠二抗。

進一步的，所述步驟（3）中待標記鼠抗是利用羊抗鼠二抗間接連接在膠體金溶液上。