[發明專利]一種膠體金利用標記羊抗鼠二抗后間接連接鼠抗標記的金標免疫層析試紙條的制備方法

有效

• 申請號: 201810498754.2
• 申請日: 2018-05-23
• 公開（公告）號: CN108872611B
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: 王欽;鄭硯超
• 申請（專利權）人: 浙江安吉賽安芙生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/58;G01N33/558;G01N33/532
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1.一種膠體金利用標記羊抗鼠二抗后間接連接鼠抗標記的金標免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)利用檸檬酸三鈉還原氯金酸制備膠體金溶液，制備的膠體金粒徑在范圍內；

(2)利用膠體金溶液標記羊抗鼠二抗，使用0.1M碳酸鉀溶液調整膠體金溶液的PH接近羊抗鼠二抗的等電點，從而使膠體金溶液與羊抗鼠二抗形成牢固結合，由于這種結合是靜電結合，所以不影響抗體的生物特性；除此之外，標記過程中還需注意體系中的離子濃度以及蛋白質純度，并在標記后通過離心濃縮的方式對膠體金溶液進行純化及濃縮；

(3)將需要標記的鼠抗加入到上述標記羊抗鼠二抗的膠體金溶液，需要標記的鼠抗是利用羊抗鼠間接連接在膠體金溶液上，由于膠體金溶液上標記了羊抗鼠二抗，所以鼠抗加入后能通過羊抗鼠二抗間接標記在膠體金溶液上；

(4)將上述間接標記鼠抗的膠體金溶液處理在結合墊上，需要注意處理的均一性以及干燥保存條件；

(5)將對應抗原處理在硝酸纖維素膜上，將對應的抗原用1×PBS溶液稀釋到合適濃度后，使用劃膜儀處理在硝酸纖維素膜上；

(6)將硝酸纖維素膜、吸水紙、結合墊、樣品墊貼于PVC塑料底板上，切條并干燥保存，結合墊為聚酯膜；如果是卡殼或筆型試紙，則需要將試紙條放置在卡殼的指定槽內；

(7)將制備好的金標免疫層析試紙條按照產品質量標準進行質量鑒定。

2.根據權利要求1所述的一種膠體金利用標記羊抗鼠二抗后間接連接鼠抗標記的金標免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中使用的還原劑為檸檬酸三鈉。

3.根據權利要求1所述的一種膠體金利用標記羊抗鼠二抗后間接連接鼠抗標記的金標免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中膠體金的直接標記抗體是羊抗鼠二抗。