[發明專利]用于量化內源蛋白質致病聚集體的標準物

在審

• 申請號: 201810497739.6
• 申請日: 2012-12-21
• 公開（公告）號: CN108593937A
• 公開（公告）日: 2018-09-28
• 發明（設計）人: D·威爾伯爾德;S·A·豐克
• 申請（專利權）人: 于利希研究中心有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C07K14/47
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 殷駿

本發明涉及用于量化作為蛋白質聚集疾病、淀粉樣變性或蛋白質錯誤折疊疾病的特征的內源蛋白質致病聚集體或寡聚物的標準物，以及這些標準物用于量化這些致病聚集體或寡聚物的用途。

本分案申請是基于申請號為201280064164.X，申請日為2012年12月21日，發明名稱為“用于量化內源蛋白質致病聚集體的標準物”的原始中國專利申請的分案申請。

本發明涉及用于量化作為蛋白質聚集疾病、淀粉樣變性或蛋白質錯誤折疊疾病的特征的內源蛋白質致病聚集體或寡聚物的標準物，以及這些標準物用于量化這些致病聚集體或寡聚物的用途。

蛋白質錯誤折疊疾病或蛋白質聚集疾病或淀粉樣變性被描述為一種由不同種類組成的臨床狀態，其共同標準在許多情況(但不排除其它情況)下是各個特定蛋白質以β折疊結構的有序構象的細胞外全身性或局部沉積。阿爾茨海默病(AD,阿爾茨海默癡呆，拉丁語＝Morbus Alzheimer)或帕金森氏病也落在該組之中。由年齡決定的癡呆是當今社會中一個越來越大的問題，這是因為由于提高的預期壽命，越來越多的人遭受其苦并因此對社會保險系統和其可資助性產生影響。

內源蛋白質病理學聚集體，例如寡聚物或纖絲，出現于許多神經變性疾病中。在阿爾茨海默癡呆的情況下，例如在大腦中發現β淀粉樣肽沉積物(Aβ肽沉積物)和在帕金森氏病情況下，共核蛋白(Synuclein)沉積物。然而，β淀粉樣肽沉積物(或斑點，由肽-纖絲構成)僅是過程的最后階段，其以從來自APP(淀粉樣前體蛋白)的單體β淀粉樣肽的分裂開始，然后形成神經毒性的β淀粉樣肽寡聚物并最后以斑點中的β淀粉樣肽纖絲的沉積物結束。AD的主要病理學特征是由Aβ肽組成的老年斑或淀粉樣斑的形成。此外，產生來自Tau蛋白的神經纖絲沉積物。Aβ肽的前體蛋白質，APP,定位于神經元的細胞膜中。通過蛋白質水解降解和可能地之后的修飾，由此產生不同長度和類型的Aβ片段，例如Aβ1-40、Aβ11-40、Aβ1-42、Aβ11-42或pyroGluAβ3-42、pyroGluAβ3-40。單體Aβ肽也在健康機體的整個一生期間都產生。

按照自1990年代的淀粉樣蛋白級聯假說，以斑點形式的Aβ沉積物是疾病癥狀的觸發者。然而近年來，不同的研究表明，特別是小的、自由擴散的Aβ寡聚物具有最大的毒性，并且對AD的發生和進展負責。因此，Aβ肽的聚集體與AD發病機理直接相關。

然而目前，可靠的診斷在引人關注的臨床癥狀出現以后才是可能的，在這種情況下，以最大90％的可靠性為出發點。目前存在的至今唯一可靠的診斷可能，直到患者死亡后通過大腦中各種不同改變的組織學檢測。

因此，存在對用于鑒定和量化記錄造成和/或作為蛋白質聚集疾病、淀粉樣變性或蛋白質錯誤折疊疾病的特征的內源蛋白質病理學聚集體或寡聚物的方法的需要。

迄今只描述了很少的用于表征和量化組織和體液中的造成蛋白質聚集疾病、淀粉樣變性或蛋白質錯誤折疊疾病的內源蛋白質致病聚集體或寡聚物的方法。

為了發展此類方法，以及保證用此測定的結果的可比較性，需要準確定義的標準物，即準確經表征的(合成的)聚合物。為了作為標準物使用，這些必須以各種不同的大小和形式存在，然而其必須是準確定義的。

然而，肽的聚集由許多因素決定，例如溫度、樣品的鹽含量、蛋白質的制備公司、純度等。因此，通過單體肽的聚集制備作為標準物的聚合物對于測試發展和驗證是難以再現的。

此外，例如迄今制備的Aβ寡聚物不是足夠穩定的，即它不能確保在不同的時間點從制備物取出Aβ寡聚物的情況下，總是存在相同的Aβ聚集體種類。

迄今已知的寡聚物制備物通常由各種不同的中間形式組成，其具有不均一的大小，并且因此是不足以再現的。