[發明專利]表達H7N9亞型禽流感病毒血凝素蛋白的重組桿狀病毒滅活疫苗及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201810489385.0
• 申請日: 2018-05-21
• 公開（公告）號: CN108888761B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發明（設計）人: 劉秀梵;胡嬌;梁艷艷;胡增壘;李如夢;王曉泉;顧敏
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: A61K39/145
• 分類號: A61K39/145;A61K39/39;C12N15/866;C12N15/41;A61P31/16
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

本發明涉及一種表達H7N9亞型禽流感病毒血凝素蛋白的重組桿狀病毒疫苗及其制備方法與應用。該疫苗包括：重組桿狀病毒rBac?JX148HA，該重組桿狀病毒能夠表達H7N9禽流感病毒主要免疫抗原HA蛋白，其免疫佐劑為SEPPIC佐劑；其中所述的HA蛋白的核酸序列如SEQ ID NO：1所示。本發明疫苗免疫雞后，能誘導較高的抗體滴度、提供針對H7N9亞型高致病性禽流感病毒的完全臨床保護、有效抑制排毒。該疫苗安全性高，克服了傳統的雞胚生產疫苗具有雞胚供應不穩定、外源病毒污染、廢棄物產量大等缺陷，在H7N9亞型禽流感的防控上具有較好的應用前景，且符合獸用疫苗利用懸浮細胞培養技術進行大規模生產的趨勢。

技術領域

本發明涉及一種疫苗技術領域，具體涉及一種表達H7N9亞型禽流感病毒血凝素蛋白的重組桿狀病毒疫苗及其制備方法與應用。

技術背景

H7N9禽流感病毒(Avian Influenza virus,AIV)可感染禽類、哺乳動物與人類，是一種嚴重威脅養禽業與人類健康的人獸共患病原。自2013年至今，我國經歷了六波H7N9流感疫情流行，并在第五波流行季的人群和禽類中檢測發現H7N9變異株，其HA蛋白裂解位點插入4個堿性氨基酸“KRTA”，標志著H7N9亞型AIV出現了由低致病性向高致病性的轉變。H7N9亞型高致病性AIV的出現為中國的公共衛生和養禽業帶來了更大的威脅和挑戰，更引發了全球對AIV的關注。家禽是H7N9病毒的來源，因此控制家禽中H7N9病毒的流行是防控H7N9疫情的關鍵。

接種疫苗是減少流感病毒感染與控制疫情發展的最佳方法之一，而傳統的雞胚生產疫苗具有雞胚供應不穩定、外源病毒污染、廢棄物產量大等缺陷。近年來，利用MDCK細胞、Vero細胞的大規模懸浮培養技術生產的禽流感疫苗也陸續出現，但是AIV在細胞中擴增會導致HA蛋白的過度糖基化，進而影響疫苗的免疫原性。相反，采用桿狀病毒表達系統表達HA蛋白能夠很好地解決這些問題：Sf9細胞可在無血清培養基中進行大規模懸浮培養，保證重組桿狀病毒的增殖與HA蛋白的大量表達；細胞培養的周期短、易放大，保證疫苗生產的時效性；桿狀病毒表達系統對糖蛋白的糖基化修飾與天然狀態相似，保持抗原的免疫原性；細胞培養產生的廢棄物量少、易無害化處理，對環境友好(Buckland B,Boulanger R,Fino M,etal.Technology transfer and scale-up of the Flublok recombinant hemagglutinin(HA)influenza vaccine manufacturing process[J].Vaccine,2014,32(42):5496-5502./Manini I,Trombetta C M,Lazzeri G,et al.Egg-Independent InfluenzaVaccines and Vaccine Candidates.[J].Vaccines,2017,5(3):18.)。此外，有文獻證實，H7N9疫苗抗原的免疫原性普遍較低，而昆蟲細胞和桿狀病毒表達系統表達外源蛋白制備的疫苗在接種過程中可以產生有效的佐劑效應(Hu Z,Jiao X,Liu X.Antibody ImmunityInduced by H7N9Avian Influenza Vaccines:Evaluation Criteria,AffectingFactors,and Implications for Rational Vaccine Design[J].Frontiers inMicrobiology,2017,8:1898./Stadlbauer D,Rajabhathor A,Amanat F,etal.Vaccination with a Recombinant H7Hemagglutinin-Based Influenza VirusVaccine Induces Broadly Reactive Antibodies in Humans[J].Msphere,2017,2(6):e00502-17./Kamal R P,Blanchfield K,Belser J A,et al.Inactivated H7InfluenzaVirus Vaccines Protect Mice despite Inducing Only Low Levels of NeutralizingAntibodies[J].Journal of Virology,2017,91(20):JVI.01202-17.)。