[發明專利]表達H7N9亞型禽流感病毒血凝素蛋白的重組桿狀病毒滅活疫苗及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201810489385.0
• 申請日: 2018-05-21
• 公開（公告）號: CN108888761B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發明（設計）人: 劉秀梵;胡嬌;梁艷艷;胡增壘;李如夢;王曉泉;顧敏
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: A61K39/145
• 分類號: A61K39/145;A61K39/39;C12N15/866;C12N15/41;A61P31/16
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

1.一種表達H7N9亞型禽流感病毒血凝素蛋白的重組桿狀病毒滅活疫苗，其特征在于，包括：重組桿狀病毒rBac-JX148HA，該重組桿狀病毒能夠表達H7N9禽流感病毒主要免疫抗原HA蛋白，所述滅活疫苗的免疫佐劑為SEPPIC佐劑；其中所述的HA蛋白的編碼基因的核酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.權利要求1所述的表達H7N9亞型禽流感病毒血凝素蛋白的重組桿狀病毒滅活疫苗的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)重組桿狀病毒rBac-JX148HA的制備：

用RT-PCR方法擴增HA基因，所得的序列如SEQ ID NO：1所示，然后將SEQ ID NO：1的基因克隆到桿狀病毒轉移載體pVL1393載體中，構建包含H7N9 JX148株HA基因的重組轉移載體，基于同源重組的原理，將重組轉移載體與苜蓿銀紋夜蛾多核型多角體病毒AcMNPV線性化的基因組DNA共轉染至昆蟲細胞Sf9，成功拯救重組桿狀病毒rBac-JX148HA，重組桿狀病毒經過連續三輪空斑純化后，在Sf9懸浮細胞中擴大培養；

(2)滅活重組桿狀病毒制備：

首先進行重組桿狀病毒的遺傳穩定性的鑒定，將重組病毒rBac-JX148HA在Sf9懸浮細胞中連續傳代，檢測每代重組病毒的基因組內的HA基因；選擇病毒滴度最高的一代作為抗原制備種毒，運用BEI的方法滅活病毒制備抗原；將徹底滅活的抗原配合SEPPIC佐劑乳化制成重組桿狀病毒滅活疫苗。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟(2)所述的運用BEI的方法滅活病毒制備抗原，具體是：將工作濃度為170mM/L的BEI與抗原液按照體積比為1：17的比例混勻，置于37℃培養搖床，120rpm輕搖48h后終止滅活；取滅活樣品分別進行血凝效價、pH值以及滅活效果測定，結果顯示滅活的抗原血凝效價為2⁵，pH＝6.6，病毒分離率為0％。