[發(fā)明專利]一種封閉探針介導的ARMS-ddPCR檢測基因突變的試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810484722.7
• 申請日: 2018-05-20
• 公開（公告）號: CN109112187A
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發(fā)明（設計）人: 祝令香;彭志勇;郭永;王勇斗
• 申請（專利權）人: 北京天健惠康生物科技有限公司;清華大學
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種封閉探針介導的ARMS-ddPCR檢測基因突變的試劑盒，所述試劑盒包括：

a.ARMS引物，其是等位基因特異性擴增引物，同時作為PCR擴增的上游引物或下游引物；

b.與ARMS引物配對進行PCR擴增的下游引物或上游引物；

c.野生型封閉探針，其與待擴增等位基因的野生型模板互補結合，從而封閉ARMS引物在野生型模板上的延伸；和

d.檢測探針；

且所述封閉探針、檢測探針與ARMS引物在同一個方向，所述封閉探針在ARMS引物和檢測探針之間，所述封閉探針與所述ARMS引物在野生型模板結合區(qū)有重疊，或者所述封閉探針不能被水解，從而達到封閉ARMS引物對野生型模板的非特異性擴增的效果。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，各個引物在擴增體系中的終濃度為200-800nM，各個探針在擴增體系中的終濃度為100-600nM。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒是用于檢測同一個基因一個或多個等位基因突變位點的試劑盒，所述試劑盒中包括一個或多個ARMS引物，其對應于等位基因每個突變位點，同時作為PCR擴增的上游引物或下游引物；和一個與ARMS引物配對進行PCR擴增的下游引物或上游引物，當所述試劑盒中包括多個ARMS引物時，所述下游引物或上游引物為共同下游引物或共同上游引物。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒是檢測人表皮生長因子EGFR基因19外顯子缺失突變的試劑盒。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒是檢測以下等位基因的突變位點中一個或多個的試劑盒：del9(2235_2248>AATTC)，del9(2238-2248>GC)，del9(2239-2247)，del9(2239-2248>C)，del12(2235_2251>AATTC)，del12(2237-2253>TTGCT)，del12(2238_2252>GCA)，del12(2239-2251>C)，del12(2240-2251del12)，del12(2235-2246del12)，del15(2233-2247del15)，del15(2235_2252>AAT)，del15(2235-2249del15)，del15(2236-2250del15)，del15(2237-2251del15)，del15(2237_2252>T)，del15(2238-2252del15)，del15(2239_2256>CAA)，del15(2239-2253del15)，del15(2240-2254del15)，del18(2235-2255>AAT)，del18(2236-2253del18)，del18(2237_2257>TCT)，del18(2237-2254del18)，del18(2237-2255-T)，del18(2238-2255del18)，del18(2239-2256DEL18)，del18(2239-2258>CA)，del18(2240-2257DEL18)，和del24(2253-2276del24)。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，用于檢測所述試劑盒檢測中作為上游引物的ARMS引物、共同下游引物、野生型封閉探針和檢測探針如下表所示，所示野生型封閉探針是選自D19野生型封閉探針1、D19野生型封閉探針2和D19野生型封閉探針3中的任一個；

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述野生型封閉探針在擴增體系中的終濃度為200-400nM。

8.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括陽性對照，所述陽性對照是含有待測突變位點的質粒DNA樣本與商品化正常人基因組DNA混合后制備：和/或還包括陰性對照，所述陰性對照是商品化正常人基因組片段化DNA。