[發(fā)明專利]一種胎兒染色體非整倍體檢測中DNA的檢測及質(zhì)控方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810484123.5
• 申請日: 2018-05-19
• 公開（公告）號: CN108642161A
• 公開（公告）日: 2018-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊瑤;余艷
• 申請（專利權(quán)）人: 長沙金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869;C12Q1/6804;C40B50/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本申請公開一種胎兒染色體非整倍體檢測中DNA的檢測及質(zhì)控方法，包括：步驟A：樣本采集、保存及質(zhì)控；步驟B：DNA提取；步驟C：文庫構(gòu)建；步驟D：文庫濃度測定及保存；步驟E：上機(jī)測序；步驟F：結(jié)果分析；本申請?zhí)峁┑奶喝旧w非整倍體檢測中DNA的檢測及質(zhì)控方法操作簡單便利并且靈活，流程科學(xué)，標(biāo)準(zhǔn)明確，實(shí)踐操作效果好。各環(huán)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格清晰，高效嚴(yán)謹(jǐn)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對21三體綜合征,18三體綜合征和13三體綜合征進(jìn)行快速的產(chǎn)前輔助診斷。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于無創(chuàng)產(chǎn)前篩查檢測領(lǐng)域，具體是指一種胎兒染色體非整倍體 檢測中DNA的檢測及質(zhì)控方法。

背景技術(shù)

生命體遺傳信息的快速獲得對于生命科學(xué)的研究有著十分重要的意義。 第一代測序儀對電泳分離技術(shù)的依賴，使其難以進(jìn)一步提高分析的速度和并 行化程度，也難以通過微型化降低測序成本。經(jīng)過不斷的技術(shù)開發(fā)和改進(jìn)， 21世紀(jì)初，以Roche454技術(shù)、illumina公司的GenomeAnalyzer技術(shù)和ABI 公司的Solid技術(shù)為標(biāo)記的第二代測序技術(shù)誕生了。第二代技術(shù)大大降低了 測序成本，還大幅度提高了測序速度并保持了高準(zhǔn)確性。其中，illumina公 司的第一臺測序儀于2006年問世，之后開發(fā)出來一系列的測序儀，如Hiseq2000、Hiseq2500、Miseq、HiseqX等，在準(zhǔn)確性、通量、成本和速度方 面表現(xiàn)更優(yōu)秀，而使其成為全球使用量最大的第二代測序儀。在第二代測序 平臺不斷完善的同時(shí)，以對單分子DNA進(jìn)行非PCR測序?yàn)橹饕卣鞯牡谌?代測序技術(shù)也初顯端倪。但由于其關(guān)鍵技術(shù)問題尚待解決，目前還未得到廣 泛應(yīng)用。

唐氏綜合征，又稱21-三體綜合征或者先天愚型，是由新生兒染色體異 常所引起的先天性疾病。唐氏綜合征的發(fā)病概率大約在1/800～1/600，在小 兒三體型染色體疾病中占的比重最高，約為70％～80％，而且該病的發(fā)病率 會隨著產(chǎn)婦生育年齡的增高而上升。產(chǎn)前診斷篩查對于篩查唐氏綜合癥是很 重要而且很有實(shí)用性的一部分，大家所熟知的產(chǎn)前診斷篩查方法主要是傳統(tǒng) 的一些篩查方法，如羊膜腔穿刺抽取羊水、絨毛膜取樣以及穿刺抽取臍帶血 等方法。這些方法帶有一定的創(chuàng)傷性，對孕婦和胎兒也會造成一定的危險(xiǎn)，嚴(yán)重者甚至可能會帶來流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。而且，穿刺抽取羊水要在孕婦孕周達(dá)到 16周以后才能進(jìn)行，因?yàn)樵兄?6周后胎兒才能達(dá)到一定的成熟度，易于檢 測。如果此時(shí)診斷結(jié)果顯示胎兒染色體異常，則已經(jīng)錯(cuò)過了最佳的流產(chǎn)時(shí)期， 可能需要通過引產(chǎn)來解決，這大大增加了孕婦的痛苦且增加了并發(fā)癥發(fā)生的 可能。

上世紀(jì)九十年代，有研究報(bào)道了孕婦的血液循環(huán)中有胎兒游離 DNA(cff-DNA)的存在，后來有研究也報(bào)道發(fā)現(xiàn)孕婦血漿中存在胎兒核糖核酸 (RNA)，這些重大的臨床研究發(fā)現(xiàn)為無創(chuàng)性產(chǎn)前篩查胎兒染色體異常提供了 新的可能性。近年來無創(chuàng)性產(chǎn)前篩查診斷取得了巨大的突破和進(jìn)展，胎兒游 離細(xì)胞已經(jīng)成功地應(yīng)用于非侵入性產(chǎn)前診斷胎兒性別和Rh血型鑒定，這些 重大的研究和成果都是建立在對母體血漿中cff-DNA序列測定的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn) 的。但是在孕婦血漿中，母源性游離DNA含量占整個(gè)游離DNA的絕大部分， cff-DNA只占孕婦血漿中游離DNA總量的3％～5％，所以傳統(tǒng)的DNA提取 技術(shù)及PCR等方法難以對胎兒唐氏綜合征進(jìn)行準(zhǔn)確的判斷。

因此，高效、準(zhǔn)確的檢測判斷胎兒染色體是否為非整倍體就顯得極為重 要，同時(shí)也成為了無創(chuàng)產(chǎn)前篩查技術(shù)的關(guān)鍵。

按照目前現(xiàn)有的樣本采集流方法，樣本采集過程不標(biāo)準(zhǔn)，樣品保存和質(zhì) 控不合格、容易導(dǎo)致樣本失效、采樣量不夠、血漿分離不徹底等問題，影響 檢測各環(huán)節(jié)的成功率。

因此，如何研發(fā)一種胎兒染色體非整倍體檢測中DNA的檢測及質(zhì)控方 法，能夠解決上述問題，便成為亟待解決的技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容