[發(fā)明專利]基于CRISPR/Cas9技術(shù)獲得Nogo-B敲除模式小鼠的方法及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810480921.0
• 申請日: 2018-05-18
• 公開（公告）號: CN108642090A
• 公開（公告）日: 2018-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高利利
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍總醫(yī)院
• 主分類號: C12N15/90
• 分類號: C12N15/90;A01K67/027
• 代理公司: 北京酷愛智慧知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11514
• 代理人: 鄒成嬌

1.一種基于CRISPR/Cas9技術(shù)獲得Nogo-B敲除模式小鼠的方法，其特征在于，包括步驟：

設(shè)計高效的識別特定基因EGE-ZXH-007的sgRNA；

將所述sgRNA連入質(zhì)粒載體上，然后進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄，得到可進(jìn)行顯微注射的Cas9/sgRNA；

將所述可進(jìn)行顯微注射的Cas9/sgRNA顯微注射到小鼠受精卵中，然后對出生的小鼠進(jìn)行基因型檢測和鑒定，確認(rèn)最終得到Nogo-B敲除模式小鼠。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于CRISPR/Cas9技術(shù)獲得Nogo-B敲除模式小鼠的方法，其特征在于：

所述sgRNA的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于CRISPR/Cas9技術(shù)獲得Nogo-B敲除模式小鼠的方法，其特征在于：

所述質(zhì)粒載體為帶T7啟動子的質(zhì)粒載體。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于CRISPR/Cas9技術(shù)獲得Nogo-B敲除模式小鼠的方法，其特征在于：

在將所述sgRNA連入質(zhì)粒載體上之前，還包括Cas9/sgRNA構(gòu)建和活性檢測的步驟。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的基于CRISPR/Cas9技術(shù)獲得Nogo-B敲除模式小鼠的方法，其特征在于：

所述Cas9/sgRNA構(gòu)建和活性檢測具體包括：將所述sgRNA連入pCS載體，得到連接產(chǎn)物Cas9/sgRNA；將所述Cas9/sgRNA轉(zhuǎn)化，然后測序驗證正確；再對Cas9/sgRNA進(jìn)行活性檢測。

6.權(quán)利要求1-5任一項所述的方法獲得的Nogo-B敲除模式小鼠在Nogo-B的功能研究中的應(yīng)用。

7.一種獲得Nogo-B敲除模式小鼠的試劑盒，其特征在于：

所述試劑盒包括能識別特定基因EGE-ZXH-007的sgRNA。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的獲得Nogo-B敲除模式小鼠的試劑盒，其特征在于：

所述sgRNA的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。