[發明專利]劍麻PGIP基因及其應用

有效

• 申請號: 201810480427.4
• 申請日: 2018-05-18
• 公開（公告）號: CN108642063B
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發明（設計）人: 張燕梅;周文劍;王瑞芳;楊子平;鹿志偉;李俊峰;陸軍迎
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院南亞熱帶作物研究所
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12Q1/6895
• 代理公司: 廣州市南鋒專利事務所有限公司 44228
• 代理人: 李慧

1.一種分離的劍麻PGIP基因，其特征在于：所述劍麻PGIP基因為AhPGIP1基因或AhPGIP2基因，所述AhPGIP1基因序列如SEQ ID No.1所示，所述AhPGIP2基因序列如SEQ IDNo.3所示；所述劍麻品種為H.11648。

2.根據權利要求1所述的分離的劍麻PGIP基因，其特征在于：所述AhPGIP1基因的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，所述AhPGIP2基因的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。

3.權利要求1或2所述的分離的劍麻PGIP基因的制備方法，包括如下步驟：

①RNA提取和cDNA合成：提取劍麻總RNA，cDNA第一鏈的合成；

②克隆所述分離的劍麻PGIP基因的PCR擴增程序為：先95℃，5min，然后進入35個循環：95℃ 30s，58℃ 1min，72℃ 30s，最后72℃ 10min ；

③測序分析獲得所述劍麻PGIP基因全長序列。

4.含有權利要求1或2所述的分離的劍麻PGIP基因的表達載體，其特征在于：所述表達載體為植物表達載體pEGAD。

5.權利要求4所述的表達載體的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：在權利要求1或2所述的AhPGIP1和AhPGIP2基因兩端分別添加EcoRI和BamHI酶切位點，通過定向酶切分別與植物表達載體pEGAD連接，構建含有目的基因AhPGIP1或AhPGIP2的植物表達載體。

6.權利要求1或2所述的分離的劍麻PGIP基因在提高劍麻或煙草對煙草疫霉抗性中的應用，其特征在于：將權利要求4所述的表達載體通過農桿菌導入煙草或劍麻中，在煙草或劍麻中表達所述AhPGIP1基因或所述AhPGIP2基因。

7.根據權利要求6所述的應用，所述農桿菌的制備方法包括：采用液氮速凍法將權利要求4所述的表達載體轉化農桿菌EHA105，挑取所述農桿菌EHA105單菌落，將其轉接到含有卡那霉素的LB液體培養基中培養過夜，待菌液OD600在0.6-1.0之間時，室溫5000rpm離心10min，收集菌體。

8.根據權利要求6所述的應用，在煙草或劍麻中表達所述AhPGIP1基因或所述AhPGIP2基因的方法包括：將含有所述AhPGIP1或AhPGIP2基因的農桿菌EHA105從煙草或劍麻葉片下表皮注射到葉片內。