[發(fā)明專利]蝎子活性蛋白

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810473979.2
• 申請日: 2018-05-17
• 公開（公告）號: CN108659111A
• 公開（公告）日: 2018-10-16
• 發(fā)明（設計）人: 金韶京
• 申請（專利權）人: 金華市飛凌生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/34;A61K35/646;A61P35/00;A61P29/00;A61P25/06;A61P7/02
• 代理公司: 北京國翰知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11696
• 代理人: 衛(wèi)翠婷

本發(fā)明公開了蝎子活性蛋白，該活性蛋白的提取方法為：向干燥全蝎粗粉中加水、莽草酸和對羥基肉桂酸，浸泡，濕法超微粉碎后離心，上清液即為提取液；調(diào)節(jié)提取液的pH，然后超濾，截留液水洗干凈，濃縮，備用；向濃縮液中加入飽和硫酸銨溶液，靜止，離心沉淀用等量的磷酸鈉緩沖液充分溶解，透析，透析液即得粗蛋白溶液；將粗蛋白溶液依次用纖維素柱、葡聚糖凝膠過濾純化，冷凍干燥，即得蝎子活性蛋白。有益效果為：本發(fā)明活性蛋白活性和純度高，含有較多種類蛋白質(zhì)，各活性蛋白間起到增益作用，提高活性蛋白的藥理作用，且該活性蛋白對機體不容易出現(xiàn)免疫原性和過敏反應，減少副作用，具有較好的發(fā)展前景。

技術領域

本發(fā)明涉及生物活性成分技術領域，特別涉及蝎子活性蛋白。

背景技術

蝎子屬于動物界的節(jié)肢動物門，蛛形綱，蝎目。是己知最古老的陸生節(jié)肢動物之一。目前，己知全世界蝎子種類有6科，70屬，650多種。在我國蝎子約有15種，如東亞鉗蝎、山蝎、藏蝎、斑蝎、遼克爾蝎、十腿蝎等，其分布也很廣，主要分布在北諱32-42度之間的華北、東北及長江以南的廣大地區(qū)，而水分較少的西北內(nèi)陸則分布較少。東亞鉗蝎亦稱馬氏鉗蝎，在我國分布最廣，主要分布在河南、河北、山東，福建、臺灣等地也有分布。也是我國傳統(tǒng)名貴中藥，以河南南陽、湖北的老河口、山東青州等地所產(chǎn)蝎子最負盛名。全蝎為東亞鉗蝎的干燥體，性味辛、平，有毒，歸肝經(jīng)，具有息風鎮(zhèn)痙、攻毒散結、通絡止痛的功效。臨床應用多入丸、散劑，其次入水煎劑。全蝎中含有蝎毒素、三甲胺、牛黃酸、甜菜堿、膽留醇、卵磷脂、甘油脂、棕櫚酸、硬脂酸、銨鹽、飽和脂肪酸等多種化學成分，其主要活性成分為蝎毒。蝎毒中的活性作用主要為蛋白質(zhì)類，具有抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、抗癲癇、抗血栓等多種藥理作用。蛋白質(zhì)在組織和細胞中一般都是以復雜的混合形式存在，各種不同類型細胞都含有上千種不同的蛋白質(zhì)。顯然，要從混雜、眾多的蛋白質(zhì)中獲取目的蛋白質(zhì)是一項艱巨的任務。目前全蝎蛋白的提取方法研宄主要包括了水煎煮、醇提法以及酶解法等，酶解法的應用最為普遍，也具有普遍的藥理效應，但提取得到蝎子活性蛋白的活性和純度不太理想，且提取率較低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種活性和純度高，含有較多種類蛋白質(zhì)，各活性蛋白間起到增益作用，藥理作用高，得率高的蝎子活性蛋白。

本發(fā)明針對上述技術中提到的問題，采取的技術方案為：

蝎子活性蛋白。該活性蛋白活性和純度高，具有抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、抗癲癇、抗血栓等多種藥理作用，同時該活性蛋白中含有較多種類蛋白質(zhì)，各活性蛋白間起到增益作用，提高活性蛋白的藥理作用，且該活性蛋白對機體不容易出現(xiàn)免疫原性和過敏反應，減少副作用，具有較好的發(fā)展前景。

蝎子活性蛋白的提取方法，其具體包括以下步驟：

步驟1：按固液比為1:10-15向干燥全蝎粗粉中加水，再加入莽草酸和對羥基肉桂酸，浸泡25-35min，濕法超微粉碎10-20min，然后在5000-10000r/min的條件下離心8-15min，上清液即為提取液備用，該步驟活性蛋白的溶出具有擴散阻力小、溶出路徑短、溶出面積大的優(yōu)點，使粉碎與提取一步完成，大大提高提取的效率，同時免去加熱，從而有效能避免蛋白結構被破壞，提高活性蛋白的活性；

步驟2：調(diào)節(jié)步驟1得提取液的pH至6.5-7.5，然后在壓力為0.25-0.35Mpa條件下經(jīng)5-6KDa分子量中空纖維膜超濾20-30min，截留液用蒸餾水反復沖洗干凈，濃縮至相對濃度為0.9-1.2g/mL，備用，該步驟條件設計合理，使得蛋白質(zhì)類與水親和力增大，膜通量達到最大，可以在不破壞活性蛋白的前提下，能有效去除濕法超微粉碎提取液中小分子核酸類物質(zhì)被超濾除去；