[發明專利]一種抗衰老的干細胞培養基及間充質干細胞培養方法

在審

• 申請號: 201810473489.2
• 申請日: 2018-05-17
• 公開（公告）號: CN108611320A
• 公開（公告）日: 2018-10-02
• 發明（設計）人: 廖立;帥逸;趙宇;鄧志宏
• 申請（專利權）人: 廣東芙金干細胞再生醫學有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種抗衰老的干細胞培養基，其特征在于，包括：

低糖α-MEM培養基、胎牛血清、miR-705 antagomir、維生素C、谷氨酰胺、青霉素和鏈霉素。

2.根據權利要求1所述的抗衰老的干細胞培養基，其特征在于，所述培養基按1升計，包括：

所述低糖α-MEM培養基 880毫升ml、所述胎牛血清100ml、所述miR-705 antagomir 10微克μg、所述維生素C 10毫克mg、所述谷氨酰胺 2毫摩爾mmol、所述青霉素 10ml和所述鏈霉素10ml。

3.根據權利要求1或2所述的抗衰老的干細胞培養基，其特征在于，所述培養基還包括：兩性霉素。

4.一種間充質干細胞培養方法，應用如權利要求1-3中任意一項所述的抗衰老的干細胞培養基，其特征在于，包括：

步驟一、間充質干細胞分離：獲取骨髓，并加入等體積的磷酸鹽緩沖液稀釋所述骨髓，加入單核細胞分離液，收集單核細胞；

步驟二、間充質干細胞的原代培養：將所述單核細胞重懸于基礎培養基中培養；

步驟三、間充質干細胞的前期傳代培養：待所述單核細胞增殖至75%-80%密度時，吸盡所述基礎培養基中的培養基，傳代，繼續用所述基礎培養基培養；

步驟四、間充質干細胞的后期傳代培養：待所述單核細胞培養至第五代之后，用所述抗衰老的干細胞培養基繼續培養。

5.根據權利要求4所述的間充質干細胞培養方法，其特征在于，所述步驟一，具體包括：

經髂骨髂脊穿刺抽取骨髓5ml，肝素抗凝；加入等體積的磷酸鹽緩沖液稀釋所述骨髓，以1：2比例加入單核細胞分離液上層，1500轉/分離心20min，吸取單核細胞層細胞；PBS重懸后離心，收集單核細胞。

6.根據權利要求4所述的間充質干細胞培養方法，其特征在于，所述步驟二，具體包括：

將所述單核細胞重懸于基礎培養基中，置于37℃，5% CO₂孵箱培養24hr；PBS清洗3次去除未貼壁細胞；剩余貼壁的單核細胞繼續培養，每3天換液。

7.根據權利要求4所述的間充質干細胞培養方法，其特征在于，所述步驟三，具體包括：

待所述單核細胞增殖至75%-80%密度時，吸盡所述基礎培養基中的培養基，使用0.5%胰酶消化后，以1：3比例傳代，繼續用所述基礎培養基培養。

8.根據權利要求4所述的間充質干細胞培養方法，其特征在于，所述步驟四，具體包括：

待所述單核細胞培養至第五代之后，用所述抗衰老的干細胞培養基繼續培養，每3天換液。

9.根據權利要求4-8中任意一項所述的間充質干細胞培養方法，其特征在于，所述方法還包括：

所述基礎培養基的制備：將胎牛血清100ml，青霉素10ml、鏈霉素10ml依次加入880mlα-MEM培養基中，混勻后置于4℃保存。

10.根據權利要求9所述的間充質干細胞培養方法，其特征在于，所述方法還包括：

所述抗衰老的干細胞培養基的制備：在1L所述基礎培養基中加入10μg miR-705antagomir、10mg維生素C和2mmol谷氨酰胺，混勻后置于4℃保存。