[發(fā)明專利]一種注射用細(xì)胞輔助自體脂肪移植物及其制備方法

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• 申請日: 2018-05-17
• 公開（公告）號: CN108704164A
• 公開（公告）日: 2018-10-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱君;鄧志宏;趙宇
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東芙金干細(xì)胞再生醫(yī)學(xué)有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/38;A61L27/50
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種注射用細(xì)胞輔助自體脂肪移植物，其特征在于，所述注射用細(xì)胞輔助自體脂肪移植物包括自體脂肪顆粒、間充質(zhì)干細(xì)胞聚集體和自體富含血小板血漿PRP。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用細(xì)胞輔助自體脂肪移植物，其特征在于，所述間充質(zhì)干細(xì)胞聚集體具有力學(xué)強(qiáng)度。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的注射用細(xì)胞輔助自體脂肪移植物，其特征在于，所述間充質(zhì)干細(xì)胞聚集體中至少包括膠原。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的注射用細(xì)胞輔助自體脂肪移植物，其特征在于，所述自體富含血小板血漿PRP中至少包括轉(zhuǎn)化生長因子β-1(TGFβ-1)、血小板源性生長因子 (PDGFs)和胰島素樣生長因子(IGFs)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的注射用細(xì)胞輔助自體脂肪移植物，其特征在于，所述自體富含血小板血漿PRP具有纖維蛋白支架作用和緩釋作用。

6.一種注射用細(xì)胞輔助自體脂肪移植物的制備方法，其特征在于，所述注射用細(xì)胞輔助自體脂肪移植物的制備方法至少包括如下步驟：

步驟一：自體脂肪顆粒的純化

處理抽脂獲得的脂肪組織，得到固態(tài)的脂肪顆粒；再將得到的脂肪顆粒去除結(jié)締組織，用組織剪將大塊組織剪碎，以1 ml注射器去除針頭后能正常抽取為宜；

步驟二：間充質(zhì)干細(xì)胞聚集體制備

將間充質(zhì)干細(xì)胞接種在一次性培養(yǎng)皿中，于37℃，5 % CO₂條件下進(jìn)行細(xì)胞膜片培養(yǎng)；使用DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)7~10天后，細(xì)胞膜片形成；將細(xì)胞膜片從邊緣揭起，在無菌環(huán)境下分割成邊長1~1.5 mm的間充質(zhì)干細(xì)胞聚集體，備用；

步驟三：自體富含血小板血漿PRP分離

根據(jù)所需比例，從患者外周靜脈抽取靜脈血，置于無菌離心管中，于1500 rpm 離心15min，將上清轉(zhuǎn)移至另一無菌離心管中，于3000 rpm離心15 min，棄去上1/3血漿后，重懸血小板制備成富含血小板血漿；

步驟四：移植物制備

將上述純化后的脂肪顆粒與間充質(zhì)干細(xì)胞聚集體充分混合，于37℃條件下孵育15~30min；然后，將脂肪顆粒、間充質(zhì)干細(xì)胞聚集體、自體富含血小板血漿充分混合，即制成脂肪移植物。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的注射用細(xì)胞輔助自體脂肪移植物的制備方法，其特征在于，所述步驟一，具體包括：

將抽脂獲得的脂肪組織 1000-2000 r/min，21℃離心 2-10min，去除液體部分，得到固態(tài)的脂肪顆粒；再將得到的脂肪顆粒去除結(jié)締組織，用組織剪將大塊組織剪碎，以1 ml注射器去除針頭后能正常抽取為宜；所述脂肪組織離心去除麻醉過程中注射的腫脹液，使脂肪組織純度更高；去除結(jié)締組織使后續(xù)移植材料混合均勻和易于注射。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的注射用細(xì)胞輔助自體脂肪移植物的制備方法，其特征在于，所述步驟二，具體包括：

將間充質(zhì)干細(xì)胞以1×10⁵~1×10⁶個(gè)/cm²密度接種在直徑為100 mm的一次性培養(yǎng)皿中，于37℃，5 % CO₂條件下進(jìn)行細(xì)胞膜片培養(yǎng)；使用DMEM高糖培養(yǎng)基，所述高糖培養(yǎng)基中含有10 % 胎牛血清（FBS）、30~70 mg/ml 維生素C、2~5 ng/ml 成纖維細(xì)胞生長因子、2~5 ng/mlTGF-β，每兩天換液一次，培養(yǎng)7~10天后，細(xì)胞膜片形成；將細(xì)胞膜片從邊緣小心揭起，在無菌環(huán)境下分割成邊長1~1.5 mm的間充質(zhì)干細(xì)胞聚集體，備用。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的注射用細(xì)胞輔助自體脂肪移植物的制備方法，其特征在于，所述步驟三，具體包括：

根據(jù)所需比例，從患者外周靜脈抽取靜脈血，置于無菌離心管中，于1500 rpm 離心15min，將上清轉(zhuǎn)移至另一無菌離心管中，于3000 rpm離心15 min，棄去上1/3血漿后，重懸血小板制備成富含血小板血漿。

10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的注射用細(xì)胞輔助自體脂肪移植物的制備方法，其特征在于，所述步驟四，具體包括：

將純化后的脂肪顆粒與間充質(zhì)干細(xì)胞聚集體按照V/V=1/1充分混合，于37℃條件下孵育15~30 min；然后，將脂肪顆粒、間充質(zhì)干細(xì)胞聚集體、富含血小板血漿充分混合，即制成脂肪移植物。