[發明專利]一種量子點–抗體免疫復合物的制備方法

有效

• 申請號: 201810472435.4
• 申請日: 2018-05-17
• 公開（公告）號: CN108918858B
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發明（設計）人: 李嫚莉;李超;胡延禎
• 申請（專利權）人: 西安交通大學蘇州研究院
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/536;G01N21/64
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 汪青;向亞蘭

本發明公開了一種量子點–抗體免疫復合物的制備方法，制備方法包括如下步驟：1）使羧基修飾的量子點與激活劑在0?10℃下、在pH值為5?6的緩沖液中反應，生成活化量子點；其中，激活劑包括1?乙基?3?(3?二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽、N?羥基琥珀酰亞胺或其硫代物；2）使步驟1）制備的活化量子點與抗體在0?10℃下、在pH值為6?9的緩沖液中反應，制成量子點–抗體免疫復合物；本發明能夠實現量子點–抗體免疫復合物具有較強的熒光強度和生物活性等特性，而且還能實現偶聯率可達90%左右，進而大大地提升了原料的利用率，有利于大規模的應用。

技術領域

本發明屬于生物標記領域，具體涉及一種量子點–抗體免疫復合物的制備方法。

背景技術

量子點(Quantum dots,QDs)是主要由ⅡB族～ⅥA族元素(如CdSe、CdTe、CdS、ZnSe等)或ⅢA族～ⅤA族元素(如InP、InAs等)構成的半導體納米顆粒。自80年代發現合成以來，由于其特殊的熒光特性等，具體諸如：1)尺寸控制發射光譜，顏色可調，可實現同種量子點多色標記；2)激發光譜寬，發射光譜窄而對稱；3)較大的斯托克斯位移；4)光化學穩定性高，耐光漂白；5)熒光效率高；6)生物相容性好；7)熒光壽命長等等，因此可擴展應用于生物標記。

目前，量子點作為新型的納米材料，其生物熒光標記的制備方法分為非共價連接和共價連接。其中非共價連接主要有靜電吸附、特異性生物靶標連接、鏈霉素-生物素連接等；共價連接包括量子點表面功能基團羧基、氨基、羥基等，在不同激活劑的活化下分別與生物分子的氨基、巰基等共價連接。其中量子點表面羧基與生物分子氨基共價連接(即量子點-抗體免疫復合物)應用最為廣泛。

現有技術中制備量子點-抗體免疫復合物的方法不一，導致了偶聯效率差別較大，制備成本增加。目前主流的制備方法為：先與激活劑反應，再與特定抗體結合進而制備得到量子點-抗體免疫復合物；然而按照目前的具體制備方法中制得的量子點-抗體免疫復合物，其偶聯率普遍偏低，較為浪費原料，不利于大規模的生產，進而限制了其在生物熒光標記中的應用。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種改進的量子點–抗體免疫復合物的制備方法，其能夠實現量子點–抗體免疫復合物具有較強的熒光強度和生物活性等特性，而且還能實現偶聯率可達90％左右，進而大大地提升了原料的利用率，有利于大規模的應用。

為解決以上技術問題，本發明采取的技術方案如下：

一種量子點–抗體免疫復合物的制備方法，所述制備方法包括如下步驟：

1)使羧基修飾的量子點與激活劑在0-10℃下、在pH值為5-6的緩沖液中反應，生成活化量子點；其中，所述激活劑包括1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺或其硫代物；

2)使步驟1)制備的所述活化量子點與抗體在0-10℃下、在pH值為6-9的緩沖液中反應，制成所述量子點–抗體免疫復合物。

根據本發明的一些優選方面，步驟1)中，所述1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽、所述N-羥基琥珀酰亞胺或其硫代物、所述羧基修飾的量子點的投料摩爾比為1000～10000︰1000～10000︰1。

根據本發明，所述羧基修飾的量子點可為核殼型或非核殼型量子點。

根據本發明的一些優選方面，所述1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺或其硫代物的添加方式以溶液形式加入，即先將1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺或其硫代物通過硼酸-硼砂緩沖溶液配制成pH值為5-6的溶液，再根據配方量加入。

根據本發明的一些優選方面，步驟1)中，控制所述反應在0-5℃下進行。

根據本發明的一些優選方面，步驟2)中，所述反應在0-5℃下進行。