[發明專利]葉酸功能化的鏈霉親和素修飾的磁性納米顆粒、其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810472017.5
• 申請日: 2018-05-17
• 公開（公告）號: CN110501208B
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發明（設計）人: 楊延蓮;鄭望舒;李平;劉長亮;王琛
• 申請（專利權）人: 國家納米科學中心
• 主分類號: G01N1/40
• 分類號: G01N1/40;G01N1/38;G01N1/34
• 代理公司: 北京市英智偉誠知識產權代理事務所(普通合伙) 11521
• 代理人: 劉丹妮

本發明提供了一種葉酸功能化的鏈霉親和素修飾的磁性納米顆粒，所述納米顆粒為使用親水性羧基化超順磁性納米顆粒以鏈霉親和素修飾、進而結合生物素標記的偶聯聚乙二醇的葉酸分子制得。還提供了該納米顆粒的制備方法和應用。本發明所述的納米顆粒成本低，生物相容性好，為在臨床血液樣品中的應用提供可能。另外，本發明不同于傳統的靶向上皮細胞粘附分子的循環腫瘤細胞分離技術，葉酸功能化磁性納米顆粒可捕獲上皮細胞粘附分子表達受限、惡性程度較高的腫瘤細胞，提供了一種富集、分離和檢測循環腫瘤的快速、準確和低成本的檢測技術，為臨床腫瘤轉移患者的預后判斷、療效監測、轉移復發監測、早期檢測等提供了有效方法。

技術領域

本發明屬于基于功能化納米材料的液體活檢技術領域，具體涉及一種葉酸功能化的鏈霉親和素修飾的磁性納米顆粒，及其制備方法和應用。

背景技術

盡管基于靶向上皮細胞粘附分子的循環腫瘤細胞捕獲技術取得了一定成功，但仍存在由上皮-間質轉化過程導致的循環腫瘤細胞丟失的可能性，因此亟需建立上皮細胞粘附分子補充標志物庫。葉酸受體是一類糖基磷脂酰肌醇受體，廣泛過量表達于卵巢癌、宮頸癌、三陰性乳腺癌、結腸癌、非小細胞肺癌等腫瘤細胞中，且其表達量水平與癌癥惡化程度呈正相關關系，故有望作為用于循環腫瘤細胞分離的目標靶點。

目前應用于癌癥和炎癥疾病的葉酸受體靶向治療方案主要基于對葉酸受體抗體、葉酸偶合物以及葉酸拮抗劑的研發，然而其作為有效的循環腫瘤細胞標志物在相關研究和臨床應用中依然沒有得到充分重視和發展。現今已有的唯一經CFDA批準的商品化肺癌循環腫瘤細胞檢測--葉酸受體陽性循環腫瘤細胞檢測試劑盒(上海格諾生物科技有限公司)基于較為復雜的PCR技術，通過有效結合CTC的探針數目與循環腫瘤細胞數目的比例換算最終得到循環腫瘤細胞檢測結果。這一技術只能對循環腫瘤細胞進行簡單和初步的技術，而無法保留細胞的完整形態實現進一步的分子生物學表征與分析。

發明內容

因此，本發明的目的在于克服現有技術中的缺陷，提供一種葉酸功能化的鏈霉親和素修飾的磁性納米顆粒，及其制備方法和應用。

在闡述本發明內容之前，定義本文中所使用的術語如下：

術語“EDC”是指：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽。

術語“sulfo-NHS”是指：N-羥基硫代琥珀酰亞胺。

術語“PBS”是指：磷酸緩沖鹽溶液。

術語“MNP”是指：磁性納米顆粒。

術語“DiO”是指：3-十八烷基-2-[3-(3-十八烷基-2(3H)-苯并惡唑-2-亞基)-1-丙烯-1-基]苯并惡唑高氯酸鹽。

術語“MES”是指：2-嗎啉乙磺酸。

為實現上述目的，本發明的第一方面提供了一種葉酸功能化的鏈霉親和素修飾的磁性納米顆粒，所述納米顆粒為使用親水性羧基化超順磁性納米顆粒以鏈霉親和素修飾、進而結合生物素標記的偶聯聚乙二醇的葉酸分子制得。

本發明的第二方面提供了第一方面所述的納米顆粒的制備方法，該制備方法可以包括以下步驟：

(1)羧基化磁性納米顆粒的制備：將FeCl₃·6H₂O溶于乙二醇形成透明溶液后，加入無水乙酸鈉與無水丙烯酸鈉，加熱劇烈攪拌，形成懸浮液后超聲，加熱超聲后的懸濁液制得羧基化磁性納米顆粒；

(2)鏈霉親和素修飾的磁性納米顆粒的制備：將步驟(1)制得的羧基化磁性納米顆粒轉移至緩沖溶液中形成分散體系；將EDC和sulfo-NHS溶解于上述磁性納米顆粒分散體系中對所述羧基化磁性納米顆粒進行活化；洗滌所述活化后的磁性納米顆粒重新分散于鏈霉親和素溶液振蕩反應，制得鏈霉親和素修飾的磁性納米顆粒；