[發明專利]一種NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細胞激素耐藥模型及其建立方法

在審

• 申請號: 201810469136.5
• 申請日: 2018-05-16
• 公開（公告）號: CN108624558A
• 公開（公告）日: 2018-10-09
• 發明（設計）人: 魯盈
• 申請（專利權）人: 浙江省中醫藥研究院
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078;C12Q1/02
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務所有限公司 33214
• 代理人: 王曉峰

本發明屬于生物醫藥領域，尤其涉及一種細胞激素耐藥模型及其建立方法。一種NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細胞激素耐藥模型，該淋巴細胞激素耐藥模型由獲取的NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細胞進行0.5～4μg/ml注射用甲基強的松龍干預獲得。本發明采用低劑量甲基強的松龍誘導人淋巴細胞產生獲得性激素耐藥，表現為P?gp表達的上調和其轉運底物羅丹明?123在細胞內積累減少，成功構建激素耐藥細胞模型。但以人為對象的研究，受到取材、倫理等多種因素的限制，給進一步深入研究激素耐藥及逆轉機制帶來不便，若能在動物中也復制出相應的淋巴細胞激素耐藥模型，將會給進一步深入研究帶來極大的方便。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，尤其涉及一種NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細胞激素耐藥模型及其建立方法和應用。

背景技術

系統性紅斑狼瘡(SLE)是一種以多系統或器官病變和血清中出現多種自身抗體為特征的自身免疫性疾病，外周血淋巴細胞的異常活化是SLE乃至各種免疫性疾病的重要特征，也是糖皮質激素或免疫抑制劑作用的重要靶細胞。因此對外周血淋巴細胞活性及功能的干預是SLE體外研究的重要途徑。

有研究認為，小鼠淋巴細胞與大鼠、人等種類的淋巴細胞不同，對體外生長刺激因子如刀豆蛋白A(ConA)、植物血凝素(PHA)等反應性非常低，因此小鼠淋巴細胞的培養過程中必需添加另外的營養和生長刺激因子成分，其中IL-2被認為是必須的。

P-gp是一種ATP依賴性的跨膜轉運蛋白，是最早發現的一種與腫瘤多藥耐藥(muhidrug resistance，MDR)有關的蛋白質，它能將多種結構和藥效不同的化合物排出細胞，導致腫瘤化療失敗。但P-gp不僅在腫瘤細胞中高表達，而且在很多正常組織中表達，如多功能干細胞、單核細胞、樹突狀細胞、淋巴細胞等。淋巴細胞作為機體最主要的免疫細胞，又是SLE等自身免疫疾病的主要治療靶點，探討其P-gp表達特點及其與激素耐藥的關系，有著重要的理論和臨床價值。

在構建細胞多藥耐藥模型方面，雖然腫瘤研究領域已經擁有了較為成熟的方法，并積累了豐富的經驗，但這一方法并不完全適合于構建淋巴細胞的多藥耐藥模型。其原因是：腫瘤細胞株具有可傳代的特點，構建腫瘤細胞多藥耐藥模型時，通過小劑量細胞毒藥物的間斷反復使用，即可通過不斷篩選而構建耐藥模型。而成熟淋巴細胞屬于原代細胞，不能傳代，若采用細胞毒藥物，則細胞將會大量死亡而導致造模失敗。

發明內容

為了解決上述的問題，本發明的一個目的是提供一種NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細胞激素耐藥模型，該模型采用小劑量甲強龍誘導，既避免了細胞死亡，又能成功誘導P-gp的高表達，本發明的另外一個目的是提供上述的耐藥模型的建立方法。

為了實現上述的第一個目的，本發明采用了以下的技術方案：

一種NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細胞激素耐藥模型，該NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細胞激素耐藥模型由NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細胞用注射用甲基強的松龍干預獲得。

作為優選，所述注射用甲基強的松龍的濃度為0.1～4μg/mL。

作為優選，所述注射用甲基強的松龍的濃度為2～4μg/mL。

本發明的另一個目的是提供一種NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細胞激素耐藥模型的建立方法，其中，該方法包括如下步驟：

1)分離NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細胞；

2)將NZW/LacJ狼瘡鼠脾淋巴細胞進行注射用甲基強的松龍干預；

3)培養、分離。